[發明專利]一種無菌松材線蟲的制備方法

無效

• 申請號: 201310417640.8
• 申請日: 2013-09-14
• 公開（公告）號: CN104430184A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 姜丹寧;李杰;齊曉倩
• 申請（專利權）人: 姜丹寧
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種無菌松材線蟲的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）將葡萄孢接種于PDA培養基上，25℃恒溫培養箱中培養7天，待氣生菌絲基本長滿培養皿時接種松材線蟲，每皿接種約200頭線蟲；將接種后的培養皿置25℃恒溫培養箱中培養10-14天，待菌絲基本被線蟲消耗完后，置于4℃儲存備用；

2）松材線蟲的分離采用貝爾曼漏斗分離法；其裝置是將直徑10-15cm的玻璃漏斗架在鐵架上，下面接一段約10cm的橡皮管，在橡皮管末端接一個1.5ml離心管，橡皮管上裝一個彈簧夾；在漏斗內放一個用細銅紗制成的漏斗狀網篩，將面巾紙或濾紙裁剪好后放置到漏斗狀網篩上，用蒸餾水浸濕濾紙，然后將待分離的培養基材料切碎放置到濾紙上；加水淹沒待分離培養基材料，靜止分離24h；由于趨水性和自身的重量，線蟲就離開培養基材料，沉降到漏斗底部的離心管中；關閉彈簧夾，取下離心管，將管中收集到的線蟲轉移至另一離心管中備用。

2.根據權利要求1所述一種無菌松材線蟲的制備方法，其特征在于還包括以下步驟：

將消毒松材線蟲蟲卵培養后獲得的松材線蟲，在無菌條件下用無菌水從灰葡萄孢斜面上收集下來，在無菌條件下研磨成線蟲勻漿，取一部分勻漿均勻涂在NA平板上，放置到28℃恒溫培養箱中培養三天，以檢測蟲卵消毒效果。

3.根據權利要求2所述一種無菌松材線蟲的制備方法，其特征在于還包括以下步驟：

將消毒后松材線蟲勻漿用做PCR模板，未做消毒處理的線蟲勻漿作為對照，同時以無菌水和大腸桿菌菌液分別作為陰性對照和陽性對照，以細菌通用引物進行PCR擴增，檢測松材線蟲消毒效果。