[發明專利]細胞系以及制備和使用其的方法

有效

• 申請號: 201310416782.2
• 申請日: 2009-02-02
• 公開（公告）號: CN103525751B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: K·謝克達
• 申請（專利權）人: 克羅莫塞爾公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/10
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 袁泉

1.表達目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質的細胞，所述細胞的特征在于它產生以適合于在功能測定法中使用的形式的目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質，其中所述目的蛋白質不包含蛋白質標簽，或所述蛋白質以這樣的形式一致地和可重復性地產生，使得所述細胞在功能測定法中具有至少0.4的Z'因子，或所述細胞在不存在選擇壓力的情況下進行培養，或其任何組合。

2.表達目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質的細胞，所述細胞的特征在于它產生以生物活性或能夠變成生物活性的形式的所述目的蛋白質，其中所述細胞在不存在選擇壓力的情況下進行培養。

3.根據權利要求1或2的細胞，其中所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質的至少一個亞單位由所引入核酸表達。

4.根據權利要求1-3中任一項的細胞，其中所述細胞進行改造以激活內源核酸的轉錄，所述內源核酸編碼所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質的至少一個亞單位。

5.根據權利要求1-4中任一項的細胞，其中所述編碼目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質的第二個亞單位的核酸是內源的。

6.根據權利要求1-4中任一項的細胞，其中所述編碼目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質的第二個亞單位的核酸是引入的。

7.根據權利要求1-6中任一項的細胞，其中所述目的蛋白質不包含蛋白質標簽。

8.根據權利要求1-7中任一項的細胞，其中所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質選自：離子通道、G蛋白偶聯受體（GPCR）、酪氨酸受體激酶、細胞因子受體、核類固醇激素受體和免疫受體。

9.根據權利要求8的細胞，其中所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質選自：甜味受體和鮮味受體。

10.根據權利要求1-9中任一項的細胞，其中所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質不具有已知配體。

11.根據權利要求1-10中任一項的細胞，其中所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質不在相同類型的細胞中表達。

12.根據權利要求1-11中任一項的細胞，其中所述細胞是哺乳動物細胞。

13.根據權利要求1-12中任一項的細胞，其中所述細胞的進一步特征在于它具有選自下述的另外所需性質：信噪比大于1，隨著時間的過去是穩定的，無選擇壓力生長而不喪失表達，生理學EC50值和生理學IC50值。

14.根據權利要求1和3-13中任一項的細胞，其中所述目的異源二聚體或異源多聚體蛋白質以一定形式一致地和可重復性地產生選自下述的時間段：至少1周、至少2周、至少3周、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月和至少9個月。

15.根據權利要求1和3-13中任一項的細胞，其中所述功能測定法選自：基于細胞的測定法、基于熒光細胞的測定法、高通量篩選測定法、基于報道細胞的測定法、G蛋白介導的基于細胞的測定法和鈣流基于細胞的測定法。

16.根據權利要求1和3-13中任一項的細胞，其中所述細胞適合于在基于細胞的高通量篩選中使用。

17.根據權利要求1-13中任一項的細胞，其中所述選擇壓力是抗生素。

18.根據權利要求1-13和17中任一項的細胞，其中所述細胞在不存在選擇壓力的情況下表達所述異源二聚體或異源多聚體蛋白質以至少15天、30天、45天、60天、75天、100天、120天或150天。

19.表達2種或更多種目的蛋白質的細胞，所述細胞的特征在于它產生以適合于在功能測定法中使用的形式的所述目的蛋白質，其中所述目的蛋白質不包含蛋白質標簽，或所述蛋白質以這樣的形式一致地和可重復性地產生，使得所述細胞在功能測定法中具有至少0.4的Z'因子，或所述細胞在不存在選擇壓力的情況下進行培養，或其任何組合。

20.表達2種或更多種目的蛋白質的細胞，所述細胞的特征在于它產生以生物活性或能夠變成生物活性的形式的所述目的蛋白質。

21.根據權利要求19或20的細胞，其中所述目的蛋白質的至少一種由所引入核酸表達。