[發明專利]檢測男性生育力的凝集素組合物及其試劑盒

無效

• 申請號: 201310415501.1
• 申請日: 2013-09-12
• 公開（公告）號: CN103472044A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 施惠娟;陶生策;辛愛潔;周樹敏;程莉;刁華;施長根;袁瑤;吳斌;顧一驊;于合國;王鵬
• 申請（專利權）人: 上海市計劃生育科學研究所;上海交通大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

技術領域

本發明涉及一種凝集素組合物及其試劑盒，具體地，涉及一種檢測男性生育力的凝集素組合物及其試劑盒。

背景技術

在哺乳動物中，精子從睪丸中生成在穿過附睪過程中，其表面覆蓋上高密度的糖分子，從而形成20-60nm厚的糖萼，大部分的糖殘基附著在蛋白質上，這些糖蛋白有的整合在精子膜上，有的松散地連在精子表面。目前，有關人精子表面糖萼的結構圖譜未知，僅知道精子胞膜糖萼的結構與男性生育力密切相關。在食蟹猴中，高度糖基化的β-defensin126（DEFB126）從附睪體部分泌并覆蓋在整個精子表面，是精子糖萼的主要糖蛋白成分，在精子穿過宮頸黏液，逃避女性生殖道的免疫監視以及免疫反應，介導精子與輸卵管上皮細胞的結合等方面起重要的作用。在人類中，約有20%的男性，其DEFB126基因編碼區發生兩個核苷酸缺失的移碼突變，并且發生純合突變（del/del）的男性其自然生育力顯著降低。

目前，研究細胞表面糖結構的技術手段不多，主要是利用凝集素與寡糖的特異性結合的流式細胞儀技術（flow?cytometry，FCM）和熒光顯微鏡的技術。其中，花生凝集素（PNA）和豌豆凝集素（PSA）可以特異性識別精子的頂體糖蛋白，而用于檢測精子的頂體反應能力。但目前沒有用凝集素芯片方法對人精子表面糖結構圖譜做全面的分析，以及通過凝集素芯片篩選不同生育力男性精子表面的差異結合凝集素，從而獲得一種可用于男性生育力篩查的凝集素組合物及其試劑盒，目前現有技術中沒有該同類產品。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種與人精子表面糖結構特異性結合的凝集素組合物，利用不同生育力男性精子細胞與此凝集素組合的結合強度不同，評價男性的生育力，為男性不育分子機制的研究以及男性不育病因診斷提供理論依據。本發明還提供了一種主要組成成分為上述凝集素組合、用于篩查男性生育力的試劑盒。

本發明通過以下技術方案實現：

一種檢測男性生育力的凝集素組合物，包括如下凝集素中的兩種或多種：Jacalin、GHA、MPL、ACL、VVL和ABA。優選的，所述Jacalin、GHA、MPL、ACL、VVL和ABA標記有熒光材料。更優選的，所述熒光材料為FITC、AIexaFluor488或熒光納米微球。

一種檢測男性生育力的試劑盒，包括上述凝集素組合物和PBS洗滌液。

在本發明中，Jacalin指木菠蘿全緣石楠凝集素，（Artocarpus?integrifolia，AIA），GHA指棉花凝集素（Gossypium?hirsutum?agglutinin)，ACL指尾穗莧凝集素（Amaranthus?caudatus?lectin)，MPL指橙桑凝集素（Maclura?pomifera?lectin），VVL指蠶豆凝集素（Vicia?villosa?lectin）和ABA指雙孢子蘑菇凝集素（Agaricus?bisporus）。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：由于DEFB126基因缺陷會導致男性生育力下降，而在本發明中用凝集素芯片篩選出6種凝集素，與DEFB126突變型的精子結合下降。用FITC標記（或其它熒光標記探針，如AIexaFluor488）的這6種凝集素與待檢測精子樣本孵育結合，經流式細胞儀、液態芯片或熒光顯微鏡檢測樣品的熒光強度，從而判定男性的生育力。本發明通過將這些凝集素組合作為男性生育力低下的篩查方法應用于臨床，能夠評價精液中精子表面糖結構指紋圖譜的變化，為男性不育分子機制的研究以及男性不育病因診斷提供理論依據。

附圖說明

通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發明的其它特征、目的和優點將會變得更明顯：

圖1為與人精子有特異結合的凝集素結果圖；

圖2為根據DEFB126雙堿基缺失突變分類的不同基因型的男性精子與凝集素結合的差異圖；

圖3為用于評估男性生育力的凝集素熒光信號結果圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本發明，但不以任何形式限制本發明。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發明的保護范圍。