[發明專利]高生長及產酸速率的D-乳酸生產菌及應用

在審

• 申請號: 201310414127.3
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN104419657A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 劉經偉;何冰芳;方曉江;孫家奪;吳斌;柏中中;陳韶輝;楊愛武;柏基業
• 申請（專利權）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石化揚子石油化工有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/56;C12R1/01
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;楊思捷

1.?一株高生長及產酸速率的D-乳酸生產菌，分類命名為菊糖芽孢乳桿菌（Sporolactobacillus?inulinus），其保藏登記號為：CCTCC?No.?M2012516。

2.?權利要求1所述D-乳酸生產菌在D-乳酸生產中的應用。

3.?權利要求1所述D-乳酸生產菌在縮短D-乳酸發酵時間中的應用。

4.?權利要求1所述D-乳酸生產菌在提高D-乳酸產量中的應用。

5.?權利要求1所述D-乳酸生產菌在提高D-乳酸產酸速率中的應用。

6.?一種生產D-乳酸的方法，其包括將權利要求1所述D-乳酸生產菌進行培養和發酵后獲得D-乳酸。

7.?一種生產D-乳酸的方法，其包括以下步驟：

1）平板培養：將權利要求1所述D-乳酸生產菌接種至平板培養基厭氧培養，培養溫度30~45℃，培養時間20~48h；

2）種子培養：將經步驟1）平板培養的菌種接種到種子培養基中進行厭氧培養，培養溫度30~45℃，培養時間12~24h；

3）發酵產酸：將步驟2）獲得的種子培養液接種到發酵培養基中進行發酵產酸，接種量為3%~15%，發酵溫度30~45℃，以總流速0.05~0.2L/min量通入氮氣，采用中和劑將發酵體系pH控制在4.5~7.0。

8.?根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的發酵產酸包括批次發酵和間歇補料發酵。

9.?根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述間歇補料發酵包括在發酵18~48h后補加碳源，進行D-乳酸發酵生產。

10.?根據權利要求7-9中任一項所述的方法，其特征在于，所述平板培養基中含葡萄糖10~30g/L，酵母膏1~3g/L，無水乙酸鈉1~4g/L，無水硫酸鎂0.1~0.3g/L，磷酸二氫鉀1~3g/L，瓊脂18g/L，水余量。

11.?根據權利要求7-9中任一項所述的方法，其特征在于，所述種子培養基的碳源包括濃度為10~40g/L的葡萄糖、玉米糖化液中的一種或兩者的混合物；氮源及生長因子包括濃度為2~20g/L的尿素、硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、氨水、酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、麩皮中的一種或多種的混合物；無水硫酸鎂0.1~0.4g/L，碳酸鈣10~30g/L，水余量。

12.?根據權利要求7-9中任一項所述的方法，其特征在于，所述批次發酵培養基的碳源包括濃度為100~180g/L的葡萄糖、玉米糖化液中的一種或兩者的混合物；氮源及生長因子包括濃度為10~40g/L的尿素、硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、氨水、酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、麩皮中的一種或多種的混合物；無水硫酸鎂0.1~1g/L，水余量。

13.?根據權利要求7-9中任一項所述的方法，其特征在于，所述間歇補料發酵培養基的初始碳源包括濃度為50~100g/L的葡萄糖、玉米糖化液中的一種或兩者的混合物；補加碳源為葡萄糖、玉米糖化液中的一種或兩者的混合物，通過補加使得間歇補料發酵的總體積及碳源濃度與批次發酵的體積及碳源濃度相同；氮源及生長因子包括濃度為10~40g/L的尿素、硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、氨水、酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、麩皮中的一種或多種的混合物；無水硫酸鎂1~10g/L，水余量。

14.?根據權利要求7-9中任一項所述的方法，其特征在于，發酵產酸步驟3）所用的中和劑選自碳酸鈉、氫氧化鈉、氧化鈣、碳氨、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氨水、碳酸鈣中的一種或組合。

15.?根據權利要求14所述的方法，其特征在于，發酵產酸步驟3）所用的中和劑為碳酸鈉和/或碳酸鈣。