[發明專利]一種畜禽免疫增強劑法氏囊多肽

有效

• 申請號: 201310413608.2
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103467571A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 傅宏慶;姚志蘭;張響英;盧煒;劉靜
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K14/465;C12N15/12;C12N15/70;A61K39/39
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種畜禽免疫增強劑法氏囊多肽，屬于獸醫生物制品技術領域。?

背景技術

疫苗免疫一般認為是防治畜禽傳染病最有效和最經濟的手段之一。然而，傳統疫苗和新型疫苗也遇到了一些難以解決的問題：疫苗對某些群體的免疫效力低下；需要反復免疫才能產生較好的免疫力；疫苗保護力易隨時間推移而嚴重降低；甚至某些傳染病尚無有效疫苗防治等。因此，很多疫苗，尤其是亞單位疫苗、DNA疫苗和多肽疫苗等新型疫苗必須產生更強大和更持久的免疫反應才能滿足需要。?

佐劑作為能夠提高疫苗免疫效果的一類重要物質，受到了廣泛研究和應用。迄今，人們發現許多物質具有免疫佐劑活性，但其中大多數由于造價高昂或具有毒副作用而未得到實際應用。近年來，免疫機理的快速深入探索，為尋找更加廉價、高效、安全的新型佐劑開辟了道路。?

法氏囊（Bursa?of?Fabricius,BF）是禽類特有的中樞免疫器官，在B淋巴細胞分化和抗體產生中起著重要的作用。法氏囊中許多多肽具有免疫增強作用。本發明即分離、鑒定出一個新的法氏囊多肽（BP14），可作為畜禽免疫增強劑。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種廉價、高效、安全的新型免疫增強劑。?

本發明通過濃縮、純化大量家禽法氏囊提取物，再經高效液相分離、收集各種組分。將各組分以一定濃度與疫苗共同免疫動物，發現了其中一種組分具有較好的免疫增強作用，添加該組分的實驗組疫苗免疫效力顯著高于未加該組分的疫苗對照組。將該組分進行氨基酸測序，發現其氨基酸序列為COOH-G-H-K-T-R-N-D-P-L-K-G-A-V-D-NH₂（即5’-Gly?His?Lys?Thr?Arg?Asn?Asp?Pro?Leu?Lys?Gly?Ala?Val?Asp-3’，序列1），并命名為法氏囊多肽（BP14）。?

1.法氏囊多肽BP14的制備?

（1）通過人工合成BP14，以一定濃度進行驗證實驗，結果該多肽表現出同樣的免疫增強作?用。免疫增強劑多肽BP14的多個串聯體COOH-G-H-K-T-R-N-D-P-L-K-G-A-V-D--G-H-K-T-R-N-D-P-L-K-G-A-V-D-NH₂（即5’-Gly?His?Lys?Thr?Arg?Asn?Asp?Pro?Leu?Lys?Gly?Ala?Val?Asp?Gly?His?Lys?Thr?Arg?Asn?Asp?Pro?Leu?Lys?Gly?Ala?Val?Asp-3’序列2）和/或?

COOH-G-H-K-T-R-N-D-P-L-K-G-A-V-D-G-H-K-T-R-N-D-P-L-K-G-A-V-D-G-H-K-T-R-N-D-P-L-K-G-A-V-D-NH₂（即5’-Gly?His?Lys?Thr?Arg?Asn?Asp?Pro?Leu?Lys?Gly?Ala?Val?Asp?Gly?HisLys?Thr?Arg?Asn?Asp?Pro?Leu?Lys?Gly?Ala?Val?Asp?Gly?His?Lys?Thr?Arg?Asn?Asp?Pro?Leu?Lys?Gly?Ala?Val?Asp-3’，序列3），具有相同的免疫增強作用。?

（2）通過查詢BP14各氨基酸的密碼子，獲得其編碼基因，如?

5’-GGUCAUAAAACUAGGAAUGACCCUCUGAAGGGUGCUGUUGAU-3’（序列4）和/或?

5’-GGUCAUAAAACUAGGAAUGACCCUCUGAAGGGUGCUGUUGAUGGUCAUAAAACUAGGAAUGACCCUCUGAAGGGUGCUGUUGAU-3’（序列5）。?

將該基因插入大腸桿菌表達載體，如：插入了?

5’-GGUCAUAAAACUAGGAAUGACCCUCUGAAGGGUGCUGUUGAU-3’序列的質粒DH5α-BP14和/或插入了?

5’-GGUCAUAAAACUAGGAAUGACCCUCUGAAGGGUGCUGUUGAUGGUCAUAAAACUAGGAAUGACCCUCUGAAGGGUGCUGUUGAU-3’序列的質粒pET32a-2BP14，收集表達產物，表達產物具有類似免疫增強作用。?

2.法氏囊多肽BP14的?