[發(fā)明專(zhuān)利]一種青蒿MYC2轉(zhuǎn)錄因子蛋白編碼序列及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310413155.3
• 申請(qǐng)日: 2013-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103602686A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐克軒;沈乾;陸續(xù);付雪晴;顏廷祥;孫小芬;王國(guó)豐
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/29
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/29;C12N15/82;C12N5/10;C12N1/21;A01H5/00;C12R1/01
• 代理公司: 上海旭誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31220
• 代理人: 周素霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種在青蒿中表達(dá)的MYC2轉(zhuǎn)錄因子蛋白編碼的核苷酸序列。本發(fā)明還涉及編碼該蛋白的核苷酸序列的用途。

背景技術(shù)

青蒿(Artemisia?annua?L.)是菊科蒿屬的一年生草本植物。青蒿素(artemisinin)是從其地上部分分離的一種含有過(guò)氧橋結(jié)構(gòu)的倍半萜內(nèi)酯化合物，是目前世界上公認(rèn)的最有效的治療瘧疾的藥物，特別是對(duì)于腦型瘧疾和抗氯喹瘧疾具有速效和低毒的特點(diǎn)。目前，世界衛(wèi)生組織推薦的最有效的治療瘧疾的方法就是青蒿素聯(lián)合療法(ACTs)。另外，隨著對(duì)青蒿素藥理研究的逐步深入，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)青蒿素及其衍生物還具有抗炎、抗血吸蟲(chóng)、抗腫瘤以及免疫調(diào)節(jié)的功能。可見(jiàn)青蒿素是一種極具潛力的天然藥物。

目前青蒿素的主要來(lái)源是從青蒿植株的地上部分提取，然而青蒿中青蒿素的含量非常低，不同種植環(huán)境和種植品種中其平均含量在青蒿葉片干重的0.01-1%，使得這種藥物的大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)受到了限制。由于青蒿素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，人工合成難度大，產(chǎn)量低，成本高。雖然目前有人成功利用酵母發(fā)酵產(chǎn)生青蒿素前體物質(zhì)青蒿酸，還需將青蒿酸人工化學(xué)半合成至青蒿素，該研究尚處于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)初級(jí)階段。也有人嘗試用組織培養(yǎng)和細(xì)胞工程的方法來(lái)生產(chǎn)青蒿素，然而青蒿素在愈傷組織中含量低于干重的0.1%，在芽中最高也只有干重的0.16%，而大多數(shù)研究在根中沒(méi)有檢測(cè)到青蒿素。因此利用組織培養(yǎng)及細(xì)胞工程來(lái)生產(chǎn)青蒿素的可行性也不高。

經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，Bruno?Dombrecht等在《The?Plant?Cell》，2007年19卷2225-2245頁(yè)發(fā)表了題為“MYC2Differentially?Modulates?Diverse?Jasmonate-Dependent?Functions?in?Arabidopsis.”的論文，報(bào)道了擬南芥中MYC2轉(zhuǎn)錄因子蛋白是擬南芥茉莉酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的核心轉(zhuǎn)錄因子。Hongbo?Zhang等在《Molecular?Plant》，2012年5卷73-84頁(yè)發(fā)表了題為“Tobacco?Transcription?Factors?NtMYC2a?and?NtMYC2b?Form?Nuclear?Complexes?with?the?NtJAZ1?Repressor?and?Regulate?Multiple?Jasmonate-Inducible?Steps?in?Nicotine?Biosynthesis”的論文，報(bào)道了MYC2轉(zhuǎn)錄因子在煙草中通過(guò)茉莉酸介導(dǎo)途徑調(diào)控尼古丁的生物合成。在本發(fā)明被公布前，尚未有任何公開(kāi)或報(bào)道過(guò)本專(zhuān)利申請(qǐng)中提及的青蒿MYC2轉(zhuǎn)錄因子蛋白編碼序列及其應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種新的青蒿MYC2轉(zhuǎn)錄因子蛋白編碼核苷酸序列。使其包含所說(shuō)基因的融合基因構(gòu)建體，攜帶該構(gòu)建體的新的重組表達(dá)載體，被所說(shuō)的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，以及由轉(zhuǎn)化細(xì)胞產(chǎn)生的所說(shuō)基因的轉(zhuǎn)基因植物及其后代，包括植物種子及植物組織，所獲得的轉(zhuǎn)基因植物將具有顯著提高青蒿素含量及顯著提高對(duì)灰霉菌的抗性。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之一是：

提供一種DNA分子，其堿基序列中包含（a）或（b）的堿基序列：

（a）SEQ?ID?NO.3中第301-2175位堿基所示的核苷酸序列，或者

與SEQ?ID?NO.3中第301-2175位堿基所示的核苷酸序列有至少70%同源性的核苷酸序列；

（b）在40-55℃條件下能與(a)限定的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。

該DNA分子能夠編碼具有SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列的多肽。

優(yōu)選地，所述的DNA分子序列具有SEQ?ID?NO.3中核苷酸第301-2175位的核苷酸序列。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之二是：

一種分離的蛋白質(zhì)，其為具有如SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的多肽，或?yàn)榫哂腥鏢EQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的多肽的保守性變異多肽或其活性片段，或其活性衍生物。

其中，所述蛋白質(zhì)的制備方法為本領(lǐng)域常規(guī)制備方法。所述制備方法較佳地為：從自然界中天然存在的蛋白質(zhì)中分離獲得，從重組表達(dá)該蛋白質(zhì)的表達(dá)轉(zhuǎn)化體中分離獲得或者通過(guò)人工合成蛋白質(zhì)序列獲得。上述蛋白質(zhì)命名為青蒿MYC2轉(zhuǎn)錄因子。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案之三是：

一種重組表達(dá)載體，所述的重組表達(dá)載體包含前述的核酸分子。