[發明專利]一種海參多糖的檢測方法

無效

• 申請號: 201310412043.6
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103454270A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 焦健;邵俊杰
• 申請（專利權）人: 大連海晏堂生物有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

1.一種海參多糖的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備海參供試液

稱取2g液體樣品或粉碎后的固體樣品置于500ml的塑料離心管中，加入100ml去離子水，混合均勻，放入已恒溫105℃的干燥箱中加熱1h，取出冷卻至室溫后，加入0.2ml堿性蛋白酶，搖勻，室溫下酶解1h，放入100℃水浴鍋中，滅活酶10min后，12000r/min高速離心30min，將離心液全部倒入量器中量取體積，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去離子水定容至刻度；

（2）制備海參多糖標準曲線

準確稱取250mg天青Ⅰ溶于250ml去離子水中，溶解搖勻，得到1mg/ml的天青Ⅰ儲備液，將天青Ⅰ儲備液與去離子水按體積比1:29混合均勻，調節使其最大吸光度A=2.1～2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青Ⅰ試液；

準確稱取0.4mg海刺參粘多糖標準物質溶于2ml去離子水中，溶解搖勻，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的標準試液；

在7個10ml試管中，分別加入標準試液0、5、10、20、30、40、50μl，將溶液體積不足50μl的試管補加入水，使每支試管中的溶液體積均為50μl，然后加入1ml天青Ⅰ試液，混勻立即測定其吸光度值，以空白50μl水加入1ml天青Ⅰ試液的吸光度為對照，平行做三組，取其算術平均值，以標準試液中海刺參粘多糖質量μg與其相應的吸光度做直線回歸，得到標準曲線；

（3）測定試樣

移取海參供試液50μl于試管中，加入1ml天青Ⅰ試液，混勻立即測定其吸光度值，以空白50μl水加入1ml天青Ⅰ試液的吸光度為對照，利用標準曲線方程計算出海參多糖相對應的質量數，再計算供試液中海參多糖的濃度。