[發明專利]富集赭曲霉毒素A的免疫親和吸附劑及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201310411949.6
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103480340A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 周曉;李川山;謝軍;李煒;韋素梅;劉運龍;謝體三;蕭浩;徐德林;林豐;林丹超
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區糧油科學研究所
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/30;G01N30/02;G01N30/50
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.制備富集赭曲霉毒素A的免疫親和吸附劑的方法，包括將赭曲霉毒素A多克隆抗體和含氨基的固相載體偶聯得到富集赭曲霉毒素A的免疫親和吸附劑的步驟；

所述赭曲霉毒素A多克隆抗體按照包括如下步驟的方法制備：以赭曲霉毒素A-NHS活性酯與載體蛋白的偶聯物為免疫原免疫非人哺乳動物得到抗血清，從所述抗血清中純化得到所述富集赭曲霉毒素A多克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯是赭曲霉毒素A通過N,N-二環己基碳化二亞胺與N-羥基琥珀酰亞胺形成的活性酯。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯按照包括如下步驟的方法制備：

1）將碘乙酸、N-羥基琥珀酰亞胺和N,N-二環己基碳化二亞胺在黑暗中進行縮合反應，得到NHS-碘乙酰活性酯；

2）將所述NHS-碘乙酰活性酯與赭曲霉毒素A進行取代反應，得到赭曲霉毒素A-NHS活性酯。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述1）為將碘乙酸、N-羥基琥珀酰亞胺和N,N-二環己基碳化二亞胺以269:695:582的摩爾比，在四氫呋喃中，20℃-25℃在黑暗中進行縮合反應，反應完畢后，以10000g離心，取上清液得到NHS-碘乙酰活性酯；

所述2）為將赭曲霉毒素A的四氫呋喃溶液與所述上清液混勻，在20-25℃進行取代反應，得到所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：從所述抗血清中純化得到所述富集赭曲霉毒素A多克隆抗體的方法包括：將所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯與所述含氨基的固相載體偶聯得到的偶聯物作為純化所述赭曲霉毒素A多克隆抗的親和層析介質，從所述抗血清中通過親和層析純化得到所述赭曲霉毒素A多克隆抗體；和/或

所述親和層析中用體積百分濃度為3%的乙酸水溶液洗脫所述赭曲霉毒素A多克隆抗體。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述含氨基的固相載體為含氨基的瓊脂糖凝膠或為含氨基的葡聚糖凝膠；和/或，

所述載體蛋白為血蘭蛋白或牛血清白蛋白。

7.由權利要求1-6中任一所述的方法制備的富集赭曲霉毒素A的免疫親和吸附劑。

8.以權利要求7所述的免疫親和吸附劑為填料的富集赭曲霉毒素A的免疫親和色譜柱。

9.含有權利要求7所述的免疫親和吸附劑或權利要求8所述的免疫親和色譜柱的富集赭曲霉毒素A的試劑盒。

10.權利要求7所述的免疫親和吸附劑，權利要求8所述的免疫親和色譜柱、或權利要求9所述的試劑盒在富集赭曲霉毒素A中的應用。