[發明專利]一種茅蒼術試管苗培養的快速繁殖方法

無效

• 申請號: 201310410873.5
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103444539A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 蘇劉花
• 申請（專利權）人: 南京澤朗農業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及組培條件下茅蒼術幼苗的培養，尤其是氯化鈣對茅蒼術試管苗次生代謝物含量的調控。

背景技術

茅蒼術的別名茅術、南蒼術，主產于江蘇、湖北、安徽、浙江、江西、河南等地，蒼術性味辛苦、濕，具有健脾、燥濕、解郁和辟穢之功效。治濕盛困脾，倦怠嗜臥，脘痞腹脹，食欲不振，嘔吐，泄瀉，痢疾，瘧疾，痰飲，時氣感冒，風寒濕痹，足痿，夜盲等癥，是我國珍貴的中藥材，從而引起藥廠、藥市、藥商和藥農的高度重視，近年來，國際市場對蒼術的需求量日益增加，蒼術被掠奪性采挖，加之對蒼術生態環境的人為破壞，造成蒼術資源的枯竭，使其瀕臨滅絕。因此擴大蒼術組織培養和人工栽培的規模是目前亟待解決的問題。茅蒼術主要含揮發油，揮發油中蒼術酮、蒼術素、茅術醇和β-桉葉醇為其主要活性成分。目前，對蒼術酮、蒼術素、茅術醇和β-桉葉醇的定量分析方法主要有TLC，?GC和HPLC等。

鈣是植物必需的一種礦質元素，它對維持細胞壁，細胞膜，膜結合蛋白的穩定性，調節無機離子運輸，作為細胞內生理生化反應的第二信使偶聯外界信號，調控多種酶活性等都具有重要的作用，適當濃度的鈣離子能提高植物組織或細胞的抗冷性、抗旱性、抗熱性、抗鹽性等。高濃度的鈣離子也會對植物產生脅迫現象。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供茅蒼術試管苗的快速繁殖方法，并通過氯化鈣對試管苗生長和次生代謝物質的調控，獲得生長良好，次生代謝物含量高的茅蒼術試管苗，可以選育出優良的茅蒼術品種，快速規模化的生產種植茅蒼術幼苗，對制藥領域的進一步開拓具有重要的現實意義。

為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案：

工藝步驟為：取茅蒼術芽，洗衣粉浸泡4分鐘，流水沖洗50分鐘，經次氯酸鈉消毒處理10-12分鐘，無菌水沖洗5遍，用吸水紙吸去無菌外植體表面的水分，獲得的無菌茅蒼術芽接種到MS培養基中進行誘導，誘導出來萌發的腋芽接種入增值培養基中（MS+NAA0.5mg/L+ZT0.2mg/L）進行叢生芽增值，增值培養3-4代，獲得長勢良好帶有葉片的叢生芽，接種到附加激素0.5?mg/L2，4-D和1?mg/L?TDZ的WPM培養基中進行生根誘導培養，獲得完整的茅蒼術試管苗。培養條件為溫度25℃，濕度50%-70%，光強度2000lx；光期14?h暗期10h，獲得的生長強壯的茅蒼術試管苗接種入WPM+0.5mg/L2，4-D+1mg/LTDZ+GA2mg/L氯化鈣4mg/L，培養一段時間取茅蒼術試管苗葉片，60℃烘干保存干樣。精密稱取研磨過的茅蒼術葉片粉末0.5g，置試管中，準確加入正己烷15?mL，超聲提取45min，用正己烷定容至15ml，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過。將提取溶液加入0.45μm的微孔濾膜濾過，為HP-1彈性石英毛細管，檢測器FID；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；載氣為氮氣;分流進樣，分流比30∶1；進樣量1μL。色譜柱為HP-1彈性石英毛細管，檢測器FID；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；載氣為氮氣;分流進樣，分流比30∶1；進樣量1μL。提取的揮發油的含量為1.976ml/g，生根率90%。

采用本發明調控出來的試管苗生根率高，長勢好，揮發油的含量高，周期短，操作可控，可進行工業擴大化生產。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

取茅蒼術芽，洗衣粉浸泡4分鐘，流水沖洗50分鐘，經次氯酸鈉消毒處理10-12分鐘，無菌水沖洗5遍，用吸水紙吸去無菌外植體表面的水分，獲得的無菌茅蒼術芽接種到MS培養基中進行誘導，誘導出來萌發的腋芽接種入增值培養基中（MS+NAA0.5mg/L+ZT0.2mg/L）進行叢生芽增值，增值培養3-4代，獲得長勢良好帶有葉片的叢生芽。接種到附加激素0.2?mg/L2，4-D和0.5?mg/L?TDZ的WPM培養基中進行生根誘導培養，獲得完整的茅蒼術試管苗。培養條件為溫度25℃，濕度50%-70%，光強度2000lx；光期14?h暗期10h，獲得的生長強壯的茅蒼術試管苗接種入WPM+0.5mg/L2，4-D+1mg/LTDZ+GA2mg/L氯化鈣2mg/L，培養一段時間取茅蒼術試管苗葉片，?60℃烘干保存干樣，采用超聲提取法提取揮發油，采用GC法檢測其含量，揮發油的含量為1.075ml/g，生根率80%。

實施例2