[發(fā)明專利]一種納米壓電免疫傳感器的制備方法及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310410554.4
• 申請(qǐng)日: 2013-09-10
• 公開（公告）號(hào): CN103630687A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李杜娟;王劍平;周玲;蓋玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州電子科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.?納米壓電免疫傳感器制備方法，其特征在于：用納米金顆粒修飾壓電石英晶體金電極，然后用酒精和去離子水沖洗后氮?dú)飧稍铮捎米越M裝技術(shù)將抗-大腸桿菌O157:H7抗體修飾于納米金表面，再將所述壓電石英晶體用乙醇胺溶液處理即得到納米壓電免疫傳感器。

2.如權(quán)利要求1所述的納米壓電免疫傳感器制備方法，其特征在于：所述壓電石英晶體金電極用納米金顆粒修飾之前，依次經(jīng)1?M?NaOH、1?M?HCl、現(xiàn)配的超級(jí)Piranha試劑分別處理5分鐘、2分鐘、5分鐘，每次處理后都用去離子水沖洗，進(jìn)行氮?dú)飧稍铩?/p>

3.如權(quán)利要求2所述的納米壓電免疫傳感器制備方法，其特征在于：所述超級(jí)Piranha試劑由61%HNO₃、30%H₂O₂和H₂SO₄以體積比為1:10:6的比例混合而成。

4.如權(quán)利要求1所述的納米壓電免疫傳感器制備方法，其特征在于：所述納米金顆粒采用檸檬酸鈉還原氯金酸制備，具體包括以下兩步：

首先是金膠種子的制備：將100?mL質(zhì)量濃度為0.01%的?HAuCl₄溶液煮沸并不斷攪拌1分鐘；接著依次加入1mL質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉和1mL質(zhì)量濃度為0.075%?硼氫化鈉的1%檸檬酸鈉溶液，間隔一分鐘；繼續(xù)攪拌5分鐘，然后在4?°C下保存；

其次是不同尺寸金膠的制備：250mL去離子水中加入2.3mL質(zhì)量濃度為1%的HAuCl₄·3H₂O煮沸，接著加入150μL金膠種子和4mL質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，制成30nm的納米金顆粒。

5.如權(quán)利要求1所述的納米壓電免疫傳感器制備方法，其特征在于：所述納米金顆粒通過1,6-己二硫醇修飾到壓電石英晶體金表面，具體是：清洗后的壓電石英晶體金電極浸泡在0.8~1?mL的1,6-己二硫醇酒精溶液中，在避光、常溫的條件下過夜；然后依次用酒精和去離子水沖洗，氮?dú)飧稍铮恍揎椓?,6-己二硫醇的壓電石英晶體金電極浸泡于1?mL的30?nm的納米金顆粒溶液中，在常溫下過夜；接著依次用酒精和去離子水沖洗，氮?dú)飧稍铩?/p>

6.如權(quán)利要求1所述的納米壓電免疫傳感器制備方法，其特征在于：抗-大腸桿菌O157:H7抗體采用自組裝16-巰基十六烷基酸膜修飾到傳感器表面，具體步驟如下：

（1）修飾了納米金顆粒的壓電石英晶體金電極浸泡于16-巰基十六烷基酸的乙醇溶液中過夜，然后依次用酒精和去離子水沖洗，氮?dú)飧稍铩?/p>

7.（2）將修飾了16-巰基十六烷基酸的壓電石英晶體金電極安裝到流動(dòng)池中，壓電石英晶體金電極在流動(dòng)池中時(shí)的操作如下：

注入1?mL?去離子水，得到基線；

注入75?mM?EDC-15?mM?NHS水溶液，反應(yīng)15~30分鐘；

依次注入1?mL去離子水、2?mL?PBS；

立即注入250?μL?100μg/mL?抗-大腸桿菌O157:H7抗體的PBS溶液，反應(yīng)1個(gè)小時(shí)；

注入3?mL?PBS，得到基線；

注入0.5?mL乙醇胺溶液，反應(yīng)5分鐘；

注入3?mL?PBS，清洗壓電石英晶體金電極，得到基線；

納米壓電免疫傳感器在大腸桿菌O157:H7檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征在于：

采用流動(dòng)注射方法檢測(cè)，大腸桿菌O157:H7與納米壓電免疫傳感器反應(yīng)時(shí)間為1小時(shí)。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：檢測(cè)大腸桿菌O157:H7之前，納米壓電免疫傳感器用1?mL的1?mM?NaOH沖洗。

9.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：采用QCA?922石英晶體分析儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)大腸桿菌O157:H7檢測(cè)過程中電極的頻率和電阻變化。