[發(fā)明專利]一種制備利西拉來的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310410018.4
• 申請(qǐng)日: 2013-09-10
• 公開（公告）號(hào): CN103709243B
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文治;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/575
• 分類號(hào): C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

1.一種制備利西拉來的方法，包括以下步驟：

1)以一種樹脂P作為載體，將Fmoc-Lys(Boc)-OH與樹脂偶聯(lián)，得到Fmoc-Lys(Boc)-OH-NH₂Resin；

2)按照Fmoc固相合成方法順序地偶聯(lián)得到片段3-44肽樹脂或片段5-44肽樹脂；其中所述片段3-44的氨基酸序列為H-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH，

并且其中所述片段5-44的氨基酸序列為H-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH；

3)按照Fmoc固相合成方法合成片段1-2肽樹脂或片段1-4肽樹脂，然后裂解得到片段1-2或片段1-4；其中所述片段1-2的氨基酸序列為Fmoc-His(Trt)-Gly-OH，并且其中所述片段1-4的氨基酸序列為Fmoc-His(Trt)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-OH；

4)將片段3-44肽樹脂在固相上偶聯(lián)片段1-2，或者

將片段5-44肽樹脂在固相上偶聯(lián)片段1-4，

得到利西拉來肽樹脂；

5)裂解利西拉來肽樹脂，得到利西拉來粗肽；

其中Fmoc為9-芴甲氧羰基，與氨基相連或與羧基所連的碳原子上的氮原子相連；

其中步驟1)中所述樹脂P為氨基樹脂，其選自Rink Amide Resin、Rink Amide AMResin、Rink Amide-MBHA Resin樹脂；以及其中步驟3)中所述樹脂為2-CTC樹脂或王樹脂。

2.權(quán)利要求1的方法，還包括純化利西拉來的步驟。

3.權(quán)利要求2的方法，其中純化通過重結(jié)晶方法或HPLC而進(jìn)行。

4.權(quán)利要求3的方法，其中HPLC為反相HPLC。

5.權(quán)利要求1的方法，其中步驟1)-4)的偶聯(lián)反應(yīng)在固相反應(yīng)柱中進(jìn)行；步驟1)-5)均在室溫和常壓下進(jìn)行。

6.權(quán)利要求1的方法，其中步驟1)中所述的氨基樹脂的替代度為0.05-0.5mmol/g；

步驟3)中所述樹脂的替代度為0.2-1.2mmol/g。

7.權(quán)利要求1的方法，其中步驟1)中所述的樹脂P為氨基樹脂，其選自Rink Amide-MBHAResin。

8.權(quán)利要求1的方法，其中步驟1)中所述氨基樹脂的替代度為0.1-0.4mmol/g。

9.權(quán)利要求8的方法，其中步驟1)中所述氨基樹脂的替代度為0.2-0.3mmol/g。

10.權(quán)利要求1的方法，其中步驟3)中所述樹脂為2-CTC樹脂。