[發明專利]一種對蝦抗病毒Argonaute蛋白及其編碼cDNA和用途

有效

• 申請號: 201310409881.8
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN103497241A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 江世貴;楊麗詩;李曉蘭;邱麗華;黃建華
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/85;C07K16/18;A61K38/17;A61P31/12;A61K48/00;A01K67/027
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;馬赟齋

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種對蝦抗病毒Argonaute蛋白及其編碼cDNA，以及該對蝦抗病毒Argonaute蛋白及其編碼cDNA在降低病毒感染對蝦死亡率及在抗病育種中的用途。

背景技術

我國是養殖蝦的主要生產國之一，2011年的海水養殖對蝦產量達到230萬噸，約占全球總產量的一半以上，在我國的水產業中具有舉足輕重的作用。但養殖對蝦時常暴發的疾病卻造成巨大的經濟損失。在過去的十幾年里,對蝦白斑綜合征病毒(WSSV)等多種病毒引起的大規模流行病給世界各地的養蝦業帶來了毀滅性的打擊。至今，白斑綜合征病毒仍是對蝦養殖業的頭號威脅。此外，一些RNA病毒如桃拉病毒(TSV)、黃頭病毒(YHV)等病毒病依然是對蝦養殖業的重要威脅。

最近，通過研究致病機理開發的抗病蛋白及方法增強對蝦免疫力和抗病力成為對蝦病毒病防治的重要方向。病毒感染細胞后首先將自身的遺傳物質進行大量復制，在此過程中，無論是DNA病毒還是RNA病毒均會產生轉錄的中間產物dsRNA。該dsRNA既可作為信使RNA（mRNA），又能作為病毒基因組的模板。mRNA翻譯結構蛋白，裝配內層衣殼后，病毒核酸進入，通過重復上述過程，最后獲得了外層衣殼，并形成病毒粒子。宿主自身存在的古老的免疫機制，即基因沉默（RNAi）機制可有效干擾病毒復制過程。

基因沉默（RNAi）是生物體一種古老的防御機制。外源性的長dsRNA或內源性的微小RNA前microRNA（pre-miRNA)在生物體分別被Dicer酶剪切為siRNA或miRNA，誘導同源靶基因mRNA特異性降解，從而導致靶基因沉默。為了對抗及逃逸這種RNAi先天免疫，多種病毒編碼了RNAi抑制蛋白，通過在RNA或蛋白質水平的作用來抑制RNAi通路。野田村病毒編碼一種RNAi抑制蛋白B2，該蛋白可以通過直接作用于果蠅Dicer-2，抑制抗病毒siRNA產生及RNA沉默復合體（RISC）組裝來逃逸宿主的免疫系統。此外，RNAi機制中的關鍵蛋白TRBP可抑制干擾素誘導的蛋白激酶活性，從而增強病毒的復制。因為這一關鍵作用，TRBP成為治療HIV-1的新型靶標。因此，RNAi機制及其關鍵因子的功能和作用對宿主的病毒防御功能至關重要。

Argonaute蛋白是RNAi機制中RNA誘導沉默復合物(RISC復合物)的核心元件，能夠結合非編碼小分子RNA，控制蛋白質的合成，影響mRNA的穩定性甚至參與同Piwi蛋白相互作用的RNA的生產。小RNA通過與Argonaute蛋白結合，達到調控基因表達的目的。Argonaute蛋白在RNAi通路中發揮的重要作用包括在動植物中對靶mRNA進行切割或翻譯水平的抑制以及在轉錄或轉錄后水平控制轉座元件的移動等。通過增強RNAi通路關鍵因子的作用，提高宿主的免疫防御功能，從而對外源病毒具有顯著防御作用。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種對蝦抗病毒Argonaute蛋白。

本發明的第二個目的是提供編碼上述對蝦抗病毒Argonaute蛋白的新cDNA。

本發明的第三個目的是提供含有上述cDNA的表達載體。

本發明的第四個目的是提供一種能與上述對蝦抗病毒Argonaute蛋白特異性結合的抗體。

本發明的第五個目的是提供上述對蝦抗病毒Argonaute蛋白的用途。

本發明的第六個目的是提供上述編碼對蝦抗病毒Argonaute蛋白cDNA的用途。

本發明提供的對蝦抗病毒Argonaute蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

本發明中，編碼上述對蝦抗病毒Argonaute蛋白的cDNA的核苷酸序列為如SEQ?ID?NO.1所示。

本發明通過在斑節對蝦轉錄組中篩選獲得Argonaute蛋白的部分序列，然后通過RACE技術克隆到斑節對蝦Argonaute蛋白基因的全表達序列。對蝦Argonaute蛋白基因全長2845bp，其開放閱讀框長2616bp，包括106bp?5’-非編碼區(5’-UTR)，起始于ATG，123bp?3’-非編碼區(3’-UTR)，終止于TGA。該基因編碼871個氨基酸組成的蛋白，分子量為99.5KDa。該基因在免疫器官中高表達，并在微生物感染早期具有重要功能，該基因可應用于對蝦的病害控制。

本發明提供的表達載體含有上述的cDNA。

本發明的提供的與上述對蝦抗病毒Argonaute蛋白特異性結合的抗體為重組Argonaute蛋白經動物免疫后制取所得。