[發明專利]一種豬印跡基因Slc22a3

無效

• 申請號: 201310409326.5
• 申請日: 2013-09-10
• 公開（公告）號: CN103468705A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 孔慶然;尹智;劉忠華;周洋
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術領域

本發明涉及一種印跡基因，尤其涉及一種豬印跡基因Slc22a3及其應用，屬于分子遺傳學領域。

背景技術

哺乳動物是二倍體生物，包含有兩套染色體，一套來源于母本，一套來源于父本。哺乳動物的正常發育需要雙親基因組的正確表達。在哺乳動物中，多數基因是雙等位基因表達的。然而，一部分基因的表達具有親源特異性，只表達來源于母本或父本的等位基因，這類基因被稱為印跡基因。將母源等位基因表達，父源等位基因不表達的基因，稱為父源印跡基因；父源等位基因表達，母源等位基因不表達的基因，稱為母源印跡基因。

印跡基因存在于哺乳動物中，作為一類不遵循傳統孟德爾遺傳規律的特殊基因而存在，其功能體現在對胚胎生長發育、胎盤功能的調控以及出生后行為的影響上。印跡基因的異常表達還引起多種疾病，比如在克隆豬的生產中，主要表現為胚胎和胎盤過度生長及胎盤異常等，主要由于體細胞的表觀重編程異?；蛴≯E基因異常等所造成。對于印跡基因的研究，始終圍繞著三個層次展開：印跡基因的篩選鑒定、印跡基因功能的探索、印跡基因表達調控機制的研究。到目前為止，在小鼠和人中發現的印跡基因數量超過150個，研究內容涵蓋了包括基因功能、分子調控網絡、印跡機制和疾病相關等方面。

與對小鼠和人的研究相比較，印跡基因在豬中的研究仍集中于挖掘與鑒定階段。主要包括了候選印跡基因的克隆，印跡狀態的鑒定與不同組織器官的差異表達等方面。印跡基因的主要功能體現在對胚胎和胎盤的影響，印跡基因的異常表達，在人上會導致如生長過剩、侏儒癥等各種生長發育方面的問題，在動物中則較明顯的表現為流產率的提高、出生率的降低。

本發明根據印跡基因在哺乳動物中具有較高保守性這一特征，利用生物信息學方法，將小鼠的印跡基因序列與豬的基因組數據進行序列比對分析，從而對豬印跡基因進行預測并篩選、鑒定，以此豐富豬印跡基因的數量，為探索印跡基因在不同物種間的保守性、調控機制以及在豬生長發育過程中的功能作用提供信息。

Slc22a3(solute?carrier?family22,member3)，又稱OCT3、EMT等，位于小鼠17號染色體和人6號染色體，編碼包含有12個跨膜區的血漿內膜蛋白，作用是消除內源性有機陽離子等。在小鼠中，在胎盤組織和TS（Trophoblast?stem?cells）細胞中是印跡的，母源等位基因表達，在成體組織中雙等位基因表達。在人上，Slc22a3基因在早期胎盤中是印跡的，母源等位基因表達，在其他時期雙等位基因表達。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種豬印跡基因Slc22a3，其cDNA序列為SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

所述Slc22a3在第10外顯子第20個堿基存在SNP位點，所述第10外顯子序列為SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。

獲得所述豬印跡基因Slc22a3的方法，主要包括以下步驟：

（1）以豬胎兒成纖維細胞cDNA為模版，PCR擴增獲得Slc22a3基因；所述PCR擴增引物為cl-Slc22a3為：正向5'-CAATGCTTGGATGCTGGAC-3'反向：5'-GACGCCAGGATACCAAAGAT-3’；

（2）以豬耳組織DNA為模版，分別PCR擴增Slc22a3基因的第9、10、11外顯子，測序法尋找到在第10外顯子第20個堿基存在SNP位點；所述PCR擴增引物分別為cl-Slc22a3-exon9：正向5'-GATACTCGTCAGATTCATTTCCACT-3'反向5'-GTTTATCTTTCATTGCGGTGC-3'，cl-Slc22a3-exon10：正向5'-GGGCTTCACTGAGGGTTTGG-3'反向：5'-CTTTGCTTTGGATGTGAGCT-3'，cl-Slc22a3-exon11：正向5'-TGCCTTTTCTAGGGCCGCTC-3'反向5'-CACAGGCGTCTCTGAAAGGCAC-3'。

本發明第二個目的是提供該豬印跡基因Slc22a3在以豬作為動物模型研究人類Slc22a3基因異常疾病與腫瘤發生及指示豬的生長發育中的應用，可用于區分父母源等位基因、鑒定印跡方向中的應用。