[發明專利]一種同時檢測宮頸癌標志物的夾心型電化學免疫傳感器

有效

• 申請號: 201310407600.5
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103472121A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 吳丹;魏琴;張勇;郭愛平;郭占魁
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種電化學免疫傳感器，更具體而言，本發明涉及一種基于Au雜化的介孔碳CMK-3（Au@CMK-3）分別與中性紅和硫堇兩種電子媒介體作為二抗標記物構建的夾心型電化學免疫傳感器、其制備方法以及由該方法制備的電化學免疫傳感器在同時檢測宮頸癌標志物中的應用。

背景技術

宮頸癌是常見的女性生殖系統惡性腫瘤，雖然近幾十年宮頸癌發病率明顯下降，但每年我國宮頸癌新發病例仍達13.15萬，約占世界宮頸癌新發病例的28.8%，且呈現年青化趨勢。盡早、準確的發現宮頸癌前病變或宮頸癌是降低宮頸癌的發病率及死亡率的關鍵。而腫瘤標志物的發現及應用成為繼影像診斷和病理診斷之后，當前臨床檢測腫瘤常用的方法之一，并用于腫瘤的隨訪及治療效果觀察。基于抗原-抗體之間特異性識別作用的免疫測定方法是檢測腫瘤標志物的一種重要的分析技術。其中,?免疫傳感器結合了高靈敏的傳感技術和高特異的免疫反應，具有實時輸出、分析靈敏度高、特異性強、使用簡便且成本低的優點,?因此，免疫傳感器被廣泛應用于早期診斷及腫瘤標志物的檢測。

鑒于現有腫瘤標志物的敏感性和特異性不夠理想，為了提高腫瘤標志物的臨床應用價值，根據不同腫瘤和不同標志物的特性，合理選擇多種標志物進行同時檢測就顯得十分重要。由于針對單個腫瘤標志物檢測的分析效率不高，為了縮短分析時間、減少分析步驟、提高分析效率、降低測試成本等，人們開始關注于實現多個樣品同時檢測的高通量電化學免疫傳感器的研究。宮頸癌的腫瘤標志物有很多，其中最主要的兩種是癌胚抗原（CEA）和鱗狀細胞癌相關抗原（SCCA）。對CEA及SCCA兩種腫瘤標志物同時檢測可彌補單一指標的局限性，對進一步提高宮頸癌的早期確診率具有重要的意義。

本發明利用rGO-TEPA的氨基和抗體自身的羧基發生酰胺反應，將rGO-TEPA用于固定一抗，Au@CMK-3分別與中性紅、硫堇兩種不同電子媒介體作為二抗標記物，制備了同時檢測CEA和SCCA兩種腫瘤標志物的夾心型電化學免疫傳感器。測試結果顯示，上述方法制備的電化學免疫傳感器的靈敏度、選擇性和穩定性高，基于上述發現，發明人完成了本發明。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種同時檢測宮頸癌兩種標志物的夾心型電化學免疫傳感器，所述電化學免疫傳感器包括：工作電極、參比電極和對電極，所述工作電極的基底電極為玻碳電極，其表面依次修飾rGO-TEPA孵化的一抗、牛血清蛋白、宮頸癌腫瘤標志物抗原和Au@CMK-3分別與中性紅、硫堇孵化的二抗。

本發明的再一個目的在于提供一種同時檢測宮頸癌兩種標志物夾心型電化學免疫傳感器的制備方法，所述方法制備的傳感器靈敏度高、重現性好、操作簡便。

所述宮頸癌兩種標志物為CEA和SCCA。

為了解決上述技術問題，本發明是通過以下措施來實現的。

本發明的夾心型電化學免疫傳感器包括：工作電極、參比電極和對電極，所述工作電極的基底電極為玻碳電極，其表面依次修飾rGO-TEPA孵化的一抗、牛血清蛋白、宮頸癌腫瘤標志物抗原和Au@CMK-3分別與中性紅、硫堇孵化的二抗。所述工作電極與參比電極、對電極組成夾心型電化學免疫傳感器來檢測宮頸癌的兩種腫瘤標志物抗原。所述參比電極為飽和甘汞電極，對電極為鉑絲電極。

本發明的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法包括以下步驟：

a、制備Au@CMK-3和電子媒介體孵化的二抗(Ab₂)溶液；

b、制備電化學免疫傳感器工作電極；

c、制作電化學免疫傳感器工作曲線。

其中，步驟a的制備Au@?CMK-3和電子媒介體孵化的二抗(Ab₂)溶液的方法，具體包括以下步驟：

①Au@CMK-3的合成：含有0.01g氯金酸的100?mL溶液放入燒瓶中加熱至沸騰，再逐滴加入1%的檸檬酸鈉并保持此溫度40?min，冷卻至室溫。向該溶液中加入介孔碳CMK-3攪拌4h。最后在9000?轉速下離心20?min，離心三次，真空干燥制得到Au@CMK-3；