[發明專利]利用湖羊生產抗ApoA1多抗血清的方法

無效

• 申請號: 201310405690.4
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103467600A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 徐志偉
• 申請（專利權）人: 鎮江萬山紅遍農業園
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

技術領域

本發明涉及一種抗原生產方法，具體涉及一種利用湖羊生產抗ApoA1多抗血清的方法及其使用方法。

背景技術

載脂蛋白A1(ApoA1)是apoA族最多的一種組份，apoA1為單一多肽鏈，由243個氨基酸殘基組成，分子量為28300D，是高密度脂蛋白(HDL)的主要載脂蛋白。是生物試劑的重要原料，現有的生產方法采用傳統的免疫方式，產量與效價較低，已無法滿足日益增長的使用需求。

發明內容

發明目的：為了克服上述現有技術的不足，本發明提供一種可提高產量與效價的利用湖羊生產抗ApoA1多抗血清的方法。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明提供的利用湖羊生產抗ApoA1多抗血清的方法包括以下步驟：

1）免疫原乳劑的制備，將含有ApoA1抗原25mg的血清0.1ml，無菌PBS1.9ml，弗氏佐劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑；

2）湖羊免疫第一針，在湖羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點，皮下注射，頸部兩側2個注射點平均注射；

3）與步驟2）間隔十天注射第二針，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點，頸部兩側淋巴結左右2個點；

4）與步驟3）間隔十天注射第三針，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點；

5）與步驟4）間隔十天注射第四針，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點；

6）與步驟5）間隔十天注射第五針，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點；

7）與步驟6）間隔十天注射第六針，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點；

8）與步驟7）間隔十天注射第七針，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點；

9）與步驟7）間隔十天對免疫的湖羊動脈采血，血液放入水箱中1小時溫度40oC，待血清充分析出，經離心沉淀分離出抗血清，放進冰箱保存溫度在4oC—8oC之間；

10）對步驟9）所得抗血清進行效價測定。

作為優選，所述步驟2）中注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。

作為優選，所述步驟3）～8）中注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。

作為優選，所述步驟10）的效價測定采用的方法為瓊擴方法。

有益效果：本發明將ApoA1抗原經皮下注入湖羊腹股溝外并進行多次加強免疫，使其產生高效羊抗ApoA1抗體效價可達1:16以上。為生物試劑廠提供原料、為醫療診斷提供方便，使湖羊產生了高的效益。

具體實施方式

實施例：實驗動物選用湖羊公羊50只，體重35公斤左右健康羊，免疫前全部打上耳標，羊群采用圈養，結合放養，保持正常體況，避免羊只過肥，提高免疫力，自動飲水器，每天牧草供給，適量添加精料、醋糟、麩皮和維生素等。

人的APOB接種0.1ml（合抗原25mg）1.9ml無菌PBS完全弗氏（或不完全）佐劑2ml制成免疫原乳劑備用。

湖羊免疫第一針，前后腹股溝，每腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點，皮下下注射，頸部兩側2個點平均注射。

第二針、間隔十天，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點，頸部兩側淋巴結左右2個注射點。

第三針、間隔十天，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點。

第四針、間隔十天，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點。

第五針、間隔十天，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點。

第六針、間隔十天，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點。

第七針、間隔十天，前后腹股溝分2個區域注射，總共12個注射點。

其中第一針即第一次免疫注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。

其余免疫中即第二至七針注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。

十天后對免疫的湖羊動脈采血，血液放入水箱中1小時溫度40oC，待血清充分析出，經離心沉淀分離出抗血清，放進冰箱保存溫度在4o～C8oC之間；

采用瓊擴方法對所得抗血清進行效價測定

1.配制瓊脂：稱取1.2g瓊脂粉，加入100ml生理鹽水中，水浴加熱溶解后，以115℃滅菌10分鐘；

滅菌結束后，取出瓊脂溶液，冷卻至70℃左右，用吸管吸取瓊脂液，加入干凈的平皿中，每塊平皿16ml，待冷卻后收起平皿，放于2～8℃冰箱中保存，可保存2周；