[發(fā)明專利]免疫增強劑及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310405668.X
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103463634B
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐志偉
• 申請（專利權(quán)）人: 鎮(zhèn)江萬山紅遍農(nóng)業(yè)園
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K9/107;A61P37/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種免疫刺激添加劑，具體涉及一種免疫增強劑及其使用方法。

背景技術(shù)

佐劑是一類先于抗原或與抗原同時作用，能非特異性地改變或增強機體對抗原的特異性免疫應答的一種物質(zhì)?？乖诿庖邉游锴?，通常需要與佐劑混合并乳化，形成乳膠（Emulsion）的形式注射使用。乳膠有“油包水”和“水包油”兩種形式。前者有利于延長抗原在體內(nèi)的存在時間和提高抗原的免疫原性，但對局部組織具有很強的刺激反應。后者有利于抗原的快速吸收，副作用小，但免疫反應可能弱且持續(xù)的時間短。

佐劑的作用原理主要包括三個方面，一是激活先天性免疫應答反應，如弗氏佐劑、免疫刺激復合物和CpG佐劑等。二是提高抗原對免疫系統(tǒng)的提呈和刺激作用，如脂質(zhì)體類佐劑和免疫刺激復合物（ISCOM）。三是延長抗原（免疫原）在機體內(nèi)的存在時間和保持對免疫系統(tǒng)的持續(xù)激活作用。很多佐劑中的礦物油成分主要是起到緩釋作用。除了弗氏佐劑兼具這三種特性以外，大多數(shù)佐劑在功能上都存在一定的缺陷。

弗氏佐劑是含油佐劑的一種，其最大的特點是具有較強的免疫增強效應，是應用最為廣泛的實驗用佐劑。弗氏佐劑包括弗氏完全佐劑（Freund’scompleteadjuvant,FCA）和弗氏不完全佐劑(Freun’sincomplatedadjuvant,FIA)。FCA除了含有礦物油等成分外，還含有滅活結(jié)核桿菌,對體液和細胞免疫系統(tǒng)具有很強的激活作用。佐劑與抗原的體積一般各占50％。最終所形成的抗原佐劑混合物是典型的“油包水”乳膠混合體。FCA能夠刺激機體產(chǎn)生很強的體液免疫和細胞免疫應答，但也具有很強的副作用，特別是皮下注射時在注射部位引起很強烈的炎癥和潰瘍。由于注射部位強烈的副反應，該佐劑只用于實驗目的的免疫研究，不適合用于制備疫苗。而FIA的起效較慢，通常需要進行8～10次免疫才能得到有實用價值的抗體，導致免疫程序長，免疫操作復雜，生產(chǎn)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：為了克服上述現(xiàn)有佐劑的不足，本發(fā)明提供一種操作簡單、起效快的免疫增強劑。

技術(shù)方案：為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的免疫增強劑包括蜂膠、海藻糖和香菇多糖，各組分的體積份數(shù)為蜂膠4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份。

作為優(yōu)選，各組分的體積份數(shù)為蜂膠5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份。

本發(fā)明同時提出上述免疫增強劑的使用方法，包括以下步驟：

1）免疫增強劑的配制，將體積份數(shù)為蜂膠4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份混合得到免疫增強劑；

2）免疫增強劑與抗原的混合，將步驟1）所得免疫增強劑與抗原按照1:9的體積比混合得到抗原混合物；

3）乳化，將步驟2）所得抗原混合物與弗氏佐劑按照1:1的體積比混合，在攪拌器中以8000～10000rpm的攪拌速度乳化1～2分鐘制成乳劑；

4）抗原的免疫，每次免疫采用10點注射法，在免疫動物每側(cè)腋下2點、每側(cè)腹股溝部位3點注射步驟3）所得乳劑，每個點皮下注射0.2ml，共計2.0ml，共計免疫6～8次，每次免疫的間隔時間為7～14天；

5）效價檢測，不同時間采血，分離血清，檢測抗體效價。

其中步驟4）第1次免疫使用抗原混合物用弗氏完全佐劑乳化得到的乳劑，第2～8次免疫使用抗原混合物用弗氏不完全佐劑乳化得到的乳劑。

有益效果：本發(fā)明的免疫增強劑及其使用方法可以縮短免疫程序、簡便免疫操作，并對免疫抗體的增強具有顯著的效果。

具體實施方式

實施例：為驗證新型佐劑配方在動物上的免疫效果，采用本發(fā)明的免疫增強劑和使用方法進行大組試驗：一組抗原中加入本發(fā)明的免疫增強劑，另一組抗原中未加免疫增強劑。

（一）含免疫增強劑的抗原乳劑制備：

1）免疫增強劑的配制，將體積份數(shù)為蜂膠5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份的三種原料混合；

2）免疫增強劑與抗原的混合，將步驟1）所得免疫增強劑與人載脂蛋白A1(ApoA1)抗原按照1:9的體積比混合；

3）乳化：將步驟2）的得到的免疫增強劑與抗原的混合物與弗氏佐劑按照1:1的體積比混合，在攪拌器中以8000～10000rpm的攪拌速度乳化1～2分鐘制成乳劑。

（二）不含免疫增強劑的抗原乳劑制備：