[發明專利]特異性循環非小細胞肺癌細胞標志物的應用

有效

• 申請號: 201310405274.4
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103439509A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 潘世揚;王芳;凌蕓;徐婷;黃珮珺
• 申請（專利權）人: 潘世揚
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，涉及特異性循環非小細胞肺癌細胞標志物的應用。

背景技術

肺癌是全世界范圍內發病率和死亡率居首位的惡性腫瘤，對人類健康造成極大的威脅，并有逐漸增加的趨勢。肺癌在我國的發病率和死亡率也居各種惡性腫瘤的首位，每年約有120萬患者死于肺癌。近年來，隨著城市空氣污染的加重，特別是PM2.5含量持續維持高位，人口的持續增長，人口老齡化的加劇，再加上吸煙、職業暴露和人體自身免疫力下降等影響腫瘤發病和死亡的危險因素的增加，肺癌的發病率和死亡率明顯上升。

根據不同的臨床表現及對放化療的靈敏度，可將肺癌分為兩大類，非小細胞肺癌（non-small?cell?lung?cancer，NSCLC）和小細胞肺癌（small?cell?lung?cancer，SCLC），非小細胞肺癌約占肺癌的80%～85%。很多患者確診時已為晚期，錯過最佳手術時期，此外無法耐受放療或化療及化療后耐藥等原因，導致肺癌5年生存率在近三十年左右的時間內仍然停留在15%這樣一個非常低的水平。I期經手術根治性治療的NSCLC中，仍有超過30%患者在5年內復發，且復發部位多為全身性轉移，提示現有臨床分期的早期就可能已有肺癌微轉移(Micrometastasis)的發生，而常規的影像學、組織學或細胞學等方法難以發現。腫瘤細胞進入血液循環是腫瘤發生遠處轉移的關鍵步驟之一。因此，對肺癌患者特異性循環肺癌細胞（specific?circulating?lung?cancer?cell，SCLCC）檢測的研究已受到越來越多的重視。

1869年，Ashworth發現血液中的一種血細胞同尸檢發現的腫瘤細胞相似，首次提出循環腫瘤細胞（circulating?tumor?cell，CTC）的概念。目前CTCs定義為自發或因診療操作脫離實體瘤原發灶或轉移灶進入外周血循環的一類腫瘤細胞，其極少見于正常人。經過免疫逃避未被清除的CTCs不僅在一定條件下可以發展為轉移灶，而且可以通過遷移、粘附、相互聚集形成循環微癌栓（circulating?tumor?microemboli，CTM）。最新研究表明這種微小癌栓還可以附著于血管內皮，導致血栓形成，引起靜脈血栓栓塞（venous?thromboembolism，VTE）。目前的腫瘤轉移理論認為，腫瘤細胞需要先從原發灶脫離并進入血液或淋巴循環，才能在遠處形成轉移灶。因此，理論上CTCs與腫瘤的血行轉移有直接關系，深入研究CTCs有助于對腫瘤轉移機制的進一步了解，為抗腫瘤轉移的治療提供新的依據。

CTCs檢測作為發現腫瘤早期轉移的新方法，無創且比傳統方法如臨床表現、影像學表現及血清標志物更可靠。CTCs的檢測有助于早期轉移腫瘤患者的診斷、監測術后患者腫瘤的復發與轉移、評估抗腫瘤藥物的敏感性與患者預后以及選擇個體化的治療策略，而且對于晚期無法取得腫瘤組織的患者起源于實體瘤的CTCs為其靶向治療的分子學檢測開啟了一扇大門。目前CTCs已被用來研究多種腫瘤，如，乳腺癌、前列腺癌、直腸結腸癌、肺癌等的微轉移并指導臨床治療。

但是，對于CTCs的檢測和分析卻并不容易，因為CTCs并沒有顯著的特異性同其它血細胞明確區分，而且不同組織學類型和分子表型的腫瘤分別表達不同的標志物；此外，CTCs在外周血中數量稀少，精確分離很困難，限制了CTCs的應用。隨著人們對腫瘤轉移機制研究的深入，尤其是伴隨現代檢測技術的廣泛應用，CTCs逐漸被人們所重視，目前廣大腫瘤研究人員特別關注的是如何找到CTCs的特異性標志物并提高檢測手段的敏感性和特異性。隨著CTCs檢測技術得到不斷改進，已取得了一些突破性的進展，部分檢測方法在穩定性、敏感性及特異性等方面均已較理想，臨床應用研究也已取得明顯進展。

目前用于循環腫瘤細胞檢測的方法流程都是基于對腫瘤細胞的富集和分析兩步法。一般而言，CTC檢測通常包括富集技術和分析技術。富集技術主要通過一些物理化學原理將這些細胞特異性地富集起來，提高CTCs檢測的敏感性。分析技術大致可以分為細胞計數和基于核酸的技術，主要依靠腫瘤細胞上存在的一些腫瘤特異性或器官特異性標記以及腫瘤細胞本身的形態學特征來發現CTCs。實際操作中常需要選擇兩個部分的不同方法并加以有效結合，最終尋找出敏感性和特異性均較高的方法。由于手工方法的步驟繁多，導致重復性差，靈敏度也很低，通常需要計數10^5～7才能夠發現1個腫瘤細胞。現有的技術需要的檢測人員水平和技術平臺水平均高，因此性價比低；同時，現有的技術無法實現真正意義上的特異性循環肺癌細胞的檢測。所以，現有的CTCs檢測技術不能夠用于特異性循環肺癌細胞的檢測。