[發明專利]一種與磷酸酶反應產生化學發光的化合物、組合物和新型制備方法

在審

• 申請號: 201310405258.5
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN104418887A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 劉振世;夏振偉
• 申請（專利權）人: 江蘇澤成生物技術有限公司
• 主分類號: C07F9/64
• 分類號: C07F9/64
• 代理公司: 北京慶峰財智知識產權代理事務所(普通合伙) 11417
• 代理人: 劉元霞

技術領域

本發明涉及一種與磷酸酶反應產生化學發光的化合物、組合物和新型工藝，屬于化合物、組合物及其制備方法的技術領域。

背景技術

堿性磷酸酯酶等水解酶經常在生物分子和藥物、激素、類固醇以及腫瘤標記物等其他重要待分析物的酶聯檢測中用作標記物。并且，磷酸酶如堿性磷酸酶(AP)和酸性磷酸酶(AcP)在醫學診斷中具有重要的臨床意義。為了安全、方便且靈敏地檢測這些酶，已公開了如化學發光法以定量測定樣品中酶量或者酶標記的待分析物量或標記的待分析物的特異結合對象的量。

二氫吖啶類化合物已知具有和磷酸(酯)酶反應并發光的能力，因此其可用于檢測磷酸酶、免疫測以及用磷酸酶標記測定待分析物的方法測定酶聯核酸、抗體、半抗原和抗原。此類化合物已記載于例如公開號為CN1312252A的中國專利申請中，其全文以引用的方式結合入本文之中。上述二氫吖啶類化合物的一個實例為下化合物J，其化學名為((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亞基)甲基磷酸二鈉：

通常，化合物J可以由如下化合物I制備得到：

發明內容

本發明提供化合物I的制備方法，在與現有技術方法類似的情形下，優化反應條件，從而提高反應產率和純度，而發明人同時發現，當對現有技術的反應條件進行簡化時，反應產率和純度得到很大提高，且反應時間大大縮短。此外，采用本發明的方法，其制備工藝簡便，產率增加，可以在產業上應用。

一種化合物I的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

其中，步驟3至7可彼此獨立地優選以如下的方法進行：

步驟3：化合物D與氯化劑反應以制備化合物E，其中所述氯化劑優選為二氯亞砜、三氯化磷和三氯氧磷中的一種或多種，反應溶劑優選甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳中的一種或多種；

化合物D與氯化劑的摩爾比可以為約1:1至約1:5，優選約1:1至約1:3，例如約1:2；

反應溫度可以為室溫至回流溫度，優選回流溫度；

反應時間可以為約1至約48小時，優選約10至約24小時，特別優選約10至約15小時，例如12小時；

反應優選在催化劑如N,N-二甲基甲酰胺的存在下進行；

優選將氯化劑滴加至化合物D的溶液中；

優選地，步驟3的產品不經純化直接進行下一步。

步驟4：化合物E在堿的存在下與4-氯苯硫酚反應以制備化合物F，其中所述堿可以為無機堿或有機堿，優選為氫氧化鉀、氫氧化鈉、吡啶、三乙胺和LDA中的一種或多種，反應溶劑優選為甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳中的一種或多種；

其中化合物D與4-氯苯硫酚的摩爾比可以為約1:1至約1:5，優選約1:1至約1:4，特別優選約1:1至約1:3，極特別優選約1:2至約1:2.2；

優選將堿滴加至包含化合物E和4-氯苯硫酚的溶液中。

步驟5：化合物F進行還原反應以制備化合物G，所述還原反應優選在鋅粉-酸體系或催化加氫體系的存在下進行，所述酸優選鹽酸、甲酸和乙酸中的一種或多種，并且反應溶劑優選為甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲基叔丁基醚和乙基叔丁基醚中的一種或多種。

步驟6：化合物G與甲基化試劑反應以制備化合物H，所述甲基化試劑優選為碘甲烷、三氟甲磺酸甲酯和/或硫酸二甲酯，反應溶劑優選為甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、甲基叔丁基醚和乙基叔丁基醚中的一種或多種；

化合物G與甲基化試劑的摩爾比可以為約1:1至約1:5，優選約1:1.5至約1::4，特別優選約1:2至約1:3，例如約1:2.5；

如果合適，反應也可以在堿的存在下進行，所述堿例如LDA或NaH等；

反應溫度可以為-10℃至回流溫度，優選-5℃至回流溫度，例如0℃至回流溫度；

反應時間可以為約1至約60小時，優選約2至約48小時，例如約2小時、約12小時或約36小時。

步驟7：化合物H在堿的存在下與三氯氧磷及3-羥基丙腈反應以制備化合物I，其中所述堿可以為無機堿或有機堿，優選為氫氧化鉀、氫氧化鈉、LDA、吡啶和三乙胺中的一種或多種，反應溶劑優選為四氫呋喃；