[發明專利]分泌牛IL-4單克隆抗體的雜交瘤細胞株、其單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201310405010.9
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103421747A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 焦新安;陳祥;文志發;徐正中;殷月蘭;潘志明;孫林;黃金林
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/24;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及分泌牛IL-4單抗的雜交瘤細胞株、其分泌的單克隆抗體及其在免疫檢測領域的應用。

背景技術

白細胞介素-4（IL-4）主要是由被有絲分裂原或特異性抗原刺激而活化的CD4⁺?Th2細胞、肥大細胞、嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞等產生的一種多效性細胞因子，具有免疫調節功能以及抗腫瘤活性，在抗胞外寄生蟲等感染中發揮重要作用。研究表明內源性IL-4水平的高低在很大程度上可以反映機體的體液免疫狀態，而抗原特異性的IL-4反應則可以作為機體針對某種特定外來抗原的體液免疫狀態的指標。

IL-4的免疫學檢測是在特異性抗IL-4?單克隆抗體（McAb）的基礎上建立的用于對樣本中的IL-4進行定性定量分析的實驗方法。應用不同的單抗標記物和檢測技術，已經開發出多種方法，如酶免疫分析法（EIA），酶聯免疫吸附法（ELISA），酶聯免疫斑點法（ELISPOT），流式細胞術（FCM）分析法等。

酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-linked?Immunosorbent?Assay，簡稱ELISA）和酶聯免疫斑點試驗（Enzyme-linked?Immunospot，簡稱ELISPOT）技術具有高度的敏感性和應用廣泛性，已成為近年來最吸引人的免疫檢測方法之一，在疫苗的研發、臨床診斷以及基礎研究等方面得到廣泛應用。與傳統的用于IL-4檢測的刺激B細胞增殖活性分析方法相比，建立在免疫反應基礎上的IL-4檢測方法的靈敏度和特異性更高，作為體液免疫狀態的重要指標，IL-4的雙抗體夾心ELISA和ELISPOT檢測方法將被廣泛地用于研究基礎和臨床免疫學、疫苗免疫效果評估、器官移植、過敏反應以及多種胞外病原感染的診斷等。

發明內容

本發明的目的是提供一種分泌牛IL-4單克隆抗體的雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體，以及該雜交瘤細胞株及其分泌的單克隆抗體在免疫檢測領域的應用。

本發明一方面提供了一種分泌牛IL-4單克隆抗體的雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株的保藏號為CCTCC?NO：C201380。

該菌株已于2013年6月8日在中國典型培養物保藏中心（地址：湖北省武漢市武漢大學）注冊保藏，保藏號為CCTCC?NO：C201380，分類命名為：雜交瘤細胞株8B7。

本發明第二方面提供了一種牛IL-4單克隆抗體，由保藏號為CCTCC?NO：C201380的雜交瘤細胞株或其傳代細胞株分泌產生。

本發明第三方面提供了前述分泌牛IL-4單克隆抗體的雜交瘤細胞株及前述牛IL-4單克隆抗體在制備牛機體免疫狀態的檢測試劑中的應用。

本發明第四方面提供了一種牛IL-4的雙抗體夾心ELISA檢測試劑盒，所述試劑盒包括：

1.?選自以下任一：

1）酶標板和捕獲抗體；?

2）包被有捕獲抗體的酶標板；

所述捕獲抗體為雜交瘤細胞株CCTCC?NO：C201380或其傳代細胞株分泌產生。

2.?生物素標記牛IL-4單克隆抗體；

所述試劑盒中，酶標板可以事先包被有捕獲抗體，也可以只提供空白酶標板與捕獲抗體，在檢測前由操作者自行采用常規方法在酶標板上包被捕獲抗體。

所述酶標板可為各種常見規格的酶標板，如96孔酶標板。

所述生物素標記牛IL-4單克隆抗體中的牛IL-4單克隆抗體不同于前述捕獲抗體。生物素標記牛IL-4單克隆抗體的方法采用常規。

進一步優選的，所述生物素標記牛IL-4單克隆抗體中的牛IL-4單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO：C201379的雜交瘤細胞株或其傳代細胞株分泌產生。

保藏號為CCTCC?NO：C201379的雜交瘤細胞株已于2013年6月8日在中國典型培養物保藏中心（地址：湖北省武漢市武漢大學）注冊保藏，分類命名為：雜交瘤細胞株4A10。

進一步的，所述試劑盒中還包括下列試劑中的一種或多種：

1）親和素-辣根過氧化物酶結合物；

2）底物液；

3）洗滌液。

上述試劑均為ELISA檢測中的通用試劑，不受具體檢測項目的限制，因此即可根據需要有選擇地加入試劑盒，也可由操作者自行配置或者單獨購買。為方便操作者，最優的選擇是試劑盒中同時包括親和素-辣根過氧化物酶結合物、底物液和洗滌液。

所述底物液可為ELISA檢測試劑盒中常用的通用底物液，如3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）底物液。