[發明專利]動物器官人源化的方法及人-動物嵌合體模型

有效

• 申請號: 201310404844.8
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN104419700B
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 陳志英;何成宜;張麗萍
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A01K67/027
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

1.一種動物器官人源化的方法，其特征在于，包括如下步驟：

構建含有DTA基因的轉基因動物以及含有Cre基因的轉基因動物，其中，所述含有DTA基因的轉基因動物的啟動子與DTA基因被兩個LoxP和一個停止序列隔開，由所述LoxP加上所述停止序列抑制表達，所述含有Cre基因的轉基因動物的Cre基因的啟動子由轉入動物體內特異性啟動子啟動的四環素依賴的反式作用子啟動；

將所述含有DTA基因的轉基因動物與所述含有Cre基因的轉基因動物雜交，并對雜交后代進行基因篩選得到含有Cre基因及DTA基因的雙轉基因動物；

向所述含有Cre基因及DTA基因的雙轉基因動物體內植入人體干細胞，制得含有人體細胞的雙轉基因動物；

對含有人體細胞的雙轉基因動物喂食或注射四環素或四環素衍生物，誘導表達Cre，從而介導兩個Loxp位點的重組，移除所述停止序列，DTA基因的啟動子接近并啟動表達DTA基因，殺死動物體內目標細胞，促進人源性細胞的增生，得到人-動物嵌合體模型。

2.如權利要求1所述的動物器官人源化的方法，其特征在于，所述含有DTA基因的轉基因動物為由ROSA26啟動子啟動表達的含有LoxP停止序列及DTA基因的動物，所述LoxP停止序列位于所述ROSA26啟動子與所述DTA基因之間。

3.如權利要求2所述的動物器官人源化的方法，其特征在于，所述含有DTA基因的轉基因動物在所述ROSA26啟動子之后依次含有如下序列：SA剪接受體序列、LoxP停止序列、eGFP序列盒、pFK-Neo序列盒、3個SV40poly A序列、LoxP停止序列及DTA基因序列。

4.如權利要求1所述的動物器官人源化的方法，其特征在于，所述動物體內特異性啟動子為動物肝臟特異性啟動子白蛋白 基因啟動子，所述人體干細胞為人肝臟干細胞。

5.如權利要求4所述的動物器官人源化的方法，其特征在于，所述含有Cre基因的轉基因動物是一種TetOn調控系統，其中TetOn調控系統所表達的反向四環素依賴的反式作用子由所述啟動子Alb啟動表達，所述Cre重組酶序列位于由所述反向四環素依賴的反式作用子啟動的hCMV啟動子之后且可由所述hCMV啟動子啟動表達。

6.如權利要求1所述的動物器官人源化的方法，其特征在于，所述動物體內特異性啟動子為動物造血干細胞特異性基因啟動子，所述人體干細胞為人造血干細胞。

7.如權利要求1-6中任一項所述的動物器官人源化的方法，其特征在于，所述動物為小鼠、豬或山羊。