[發明專利]一種提高百合多糖活性的酶法修飾制備方法

有效

• 申請號: 201310404673.9
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103436571A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 陳志剛;張丹妮;王芬;郭曉玉
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種提高百合多糖活性的生物修飾制備方法，其特征在于采用復合酶(β-甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶)法對百合多糖(403.3kDa)進行生物修飾(即酶法可控降解)，通過反應條件控制，獲得系列高免疫活性百合多糖修飾產物。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于復合酶的作用條件為：底物百合多糖濃度30～40g/L；β-甘露聚糖酶濃度500～900U/L，β-葡聚糖酶250～450U/L；pH5.5～6.5(PBS緩沖液)；溫度40～55℃；時間0.5～1.0h。

3.根據權利要求1～2所述的方法，在復合酶中，β-甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶用量比為2∶1(U/U)。

4.根據權利要求1～3所述的方法，其特征在于反應結束后去除酶及產物分離制備方法為：反應結束后，將溶液加熱至100℃，保溫5min，而后離心(6000rpm)去除酶蛋白，將上清液放入透析袋(截留分子量為5.0kDa)內透析(4℃，12h)，透析結束后將樣品離心(5000rpm)，取上清液冷凍干燥，即可獲得白色粉末狀百合多糖修飾產物，百合多糖修飾產物的分子量范圍是8.0kDa～70.0kDa。

5.根據權利要求1～4所述的方法，其特征在于采用體外巨噬細胞RAW264.7模型研究百合多糖及修飾產物體外免疫調節活性，修飾后的百合多糖活性顯著提高，與底物相比，對巨噬細胞增殖活性增加40.5～77.2％。百合多糖的分子量過高或過低，其活性都較低。

6.根據權利要求1～5所述的方法，其特征在于百合多糖、β-甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶，pH，溫度及作用時間優選組合為35g/L、800U/L和400U/L、6.0(PBS緩沖液)、50℃和45min。在此作用條件下，百合多糖修飾產物的分子量為30.5kDa。與底物百合多糖相比，對巨噬細胞增殖活性增加77.2％。