[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒2型毒株及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310404122.2
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103421748A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設計）人: 鄒敏;張恒;劉新文;申洪銀;宮曉;劉蕾;鄒桂榮;韓乃君;陶曉珊
• 申請（專利權(quán)）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于畜禽致病菌篩選技術(shù)領域，具體涉及一種豬圓環(huán)病毒2型毒株及其應用。

背景技術(shù)

1991年加拿大John?Harding報道了斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning?Multisystemic?Wasting?Syndrome，PMWS），后經(jīng)廣泛深入的調(diào)查和研究，于1998年證實豬圓環(huán)病毒(Porcine?Circovirus，PCV)為主要病原。現(xiàn)已證實，豬圓環(huán)病毒病(Porcine?Circovirus?Disease，PCVD)是由豬圓環(huán)病毒2型(Porcine?Circovirus2，PCV2）感染而引起的一種臨床癥狀為漸進性消瘦、呼吸困難、急促、貧血、腹瀉、黃疸、間質(zhì)性肺炎、淋巴腺炎及腎炎的病毒性疾病，主要侵害5～12周齡斷奶仔豬，與近年來發(fā)生的PMWS、豬皮炎與腎炎綜合征（Porcine?Dermatitis?and?Nephropathy?Syndrome，PDNS）、豬呼吸道綜合征(Porcine?Respiratory?Disease?Complex，PRDC)、A2型先天性振顫(Congenital?Tremor，CT)、豬增生性和壞死性肺炎(Porcine?Proliferative?and?Necrotizing?Pneumonia，PNP)、繁殖障礙(Reproductive?Failure)等疾病都有密切相關。PCV2的危害在于能夠使感染豬只的免疫功能受到損害，導致機體抵抗力下降，同時，該病易繼發(fā)其它細菌、病毒感染，使豬只發(fā)病率，死亡率提高，給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟損失。經(jīng)病原學和血清學調(diào)查證實，PCV2呈世界性分布，給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟損失。對此，國內(nèi)外開展了PCV2疫苗研究，部分已經(jīng)獲得批準和生產(chǎn)，并已發(fā)揮了一定的免疫預防效果，但各地仍時有本病發(fā)生，并能在健康豬群中檢測到病原存在，說明現(xiàn)有的PCV2疫苗預防效果并不理想，究其原因，除養(yǎng)殖、疾病因素外，還可能與疫苗的抗原含量較低（生產(chǎn)細胞株為PK15，PCV2不能致其產(chǎn)生CPE，無法準確測定病毒效價）、疫苗制備工藝粗糙、毒株發(fā)生變異等因素有關。因此，篩選出新的變異毒株，對于制備PCV2疫苗就具有重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種豬圓環(huán)病毒2型毒株及其應用，即一種新型的豬圓環(huán)病毒2型毒株，該毒株增殖力高、免疫原性好，其滅活制備的疫苗能夠有效預防豬圓環(huán)病毒病。

本發(fā)明中制苗用的豬圓環(huán)病毒2型（Porcine?Circovirus2）毒株PCV2SD株，已于2013年5月31日保藏在位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?NO.7707。

本發(fā)明的PCV2SD株用于制備疫苗；

本發(fā)明還提供一種疫苗，所述的疫苗包括有抗原和疫苗佐劑，其中抗原為滅活的PCV2SD病毒株。

其中滅活的PCV2SD病毒株是用甲醛滅活病毒液制備的。

本發(fā)明制備的疫苗用于預防豬圓環(huán)病毒病。

本發(fā)明的PCV2SD病毒株免疫效力好，用于毒株增殖的MPR細胞以常規(guī)方法即可很好的增殖，可以同步接毒也可常規(guī)方法接毒，接種培養(yǎng)后收獲的病毒滴度高達10^5.25TCID/0.1ml以上，高于常規(guī)用PK15等細胞培養(yǎng)的滴度。用PCV2SD病毒株制備的疫苗能夠很好地預防圓環(huán)病毒病的發(fā)生或流行，免疫后進行ELISA檢測，保護率可達90%以上；與國內(nèi)上市銷售的其他同類疫苗進行免疫效力比較發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的疫苗具有抗體產(chǎn)生快，保護期較長（長達5個月以上），可以明顯縮短免疫空白區(qū)，降低免疫次數(shù)，提高經(jīng)濟效益。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細的描述。

一、豬圓環(huán)病毒2型（Porcine?Circovirus2）毒株PCV2SD株的篩選

1.毒株的篩選