[發(fā)明專利]一種腫瘤標志物的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310403561.1
• 申請日: 2013-09-05
• 公開（公告）號: CN104422769A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設計）人: 王倩;鮑軍波;姚波;劉佩莉
• 申請（專利權）人: 天津市醫(yī)藥科學研究所
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種腫瘤標記物的檢測方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)首先需要制備具有anti-XX?PcAb-4-MBA-HGNs結構的SERS探針。在加入多克隆抗體anti-XX這一步，分別加入CA153和CA125抗體制成anti-CA153PcAb-4-MBA-HGNs和anti-CA125PcAb-4-MBA-HGNs兩種SERS探針。

實驗開始之前，需事先準備若干SERS微流控芯片，其中F、G、H三條微通道底面上濺射有金納米顆粒。

對照品的準備。首先，關閉除A閥門以外的所有閥門，用微量注射泵將A通道注滿雙蒸水后關閉A閥門。然后，打開B閥門，用微量注射泵將B通道注滿1％的BSA溶液后關閉B閥門。打開C閥門，用微量注射泵將C通道注滿PBS溶液后關閉C閥門。最后，依次打開D、E兩個閥門，用微量注射泵將與它們對應的通道依次注滿anti-CA153PcAb-4-MBA-HGNs和anti-CA125PcAb-4-MBA-HGNs探針溶液后依次關閉D、E兩個閥門。

待測樣品的準備。對上述幾種待測樣品，嚴格按照上述步驟進行實驗操作。首先，開啟微流控芯片上的F、G、H三個閥門，用微量注射泵從進液口向對應的3條通道內注射PBS緩沖液至充滿，而后將0.008mol/L的EDC和0.012mol/L的NHS混合溶液(V：V＝1：1)從進液口以3.1mL/min的流速注射進入微通道對金基底活化30min。活化完成后再從進液口向通道中持續(xù)注入PBS溶液5min對微通道進行清洗，以清除殘余的EDC/NHS溶液。

(2)然后，依次打開F、G、H三個閥門，分別將10μg/mL的anti-CA153、anti-CA125和anti-Ab抗體從進液口經(jīng)15min分別注射入微通道，以使它們固定在微通道中經(jīng)EDC/NHS溶液活化的金基底上。等anti-XX?McAbs抗體在金基底上固定好之后，經(jīng)進液口向微通道注入1％的BSA溶液，以封閉F、G、H三個通道中未被特異性結合的羧基。封閉完成后再從進液口向通道中持續(xù)注入PBS溶液5min對F、G、H三個微通道進行清洗，以清除殘余的EDC/NHS溶液。

(3)第三步，依次打開F、G、H三個閥門，分別將50μg/mL的anti-CA153、anti-CA125和anti-Ab抗原經(jīng)進液口以1.0mL/min的速度分別注射入對應的微通道，隨后將整個芯片培養(yǎng)30min。之后再從進液口向通道中持續(xù)注入PBS溶液5min對微通道進行清洗，以清除沒有進行特異性結合的anti-XX抗原。

(4)最后，打開F、G、H三個閥門，將0.008μmol/L的anti-CA153PcAb-4-MBA-HGNs和anti-CA125PcAb-4-MBA-HGNs的混合液經(jīng)進液口以3.1mL/min的流速注射進入微通道，以形成三明治結構的免疫復合物。這一步操作完成以后即可選取SERS微流控芯片微通道上的任意位置進行SERS檢測，而后借助軟件或人工對所得SERS信號光譜進行分析以實現(xiàn)對待測物質的定性、定量分析。