[發明專利]灰樹花253菌株粗多糖在抗禽流感H5N1病毒上的應用

有效

• 申請號: 201310401635.8
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103816176A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 宋愛榮;趙晨;孔超;田雪梅;張京宣
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A61K31/715
• 分類號: A61K31/715;A61P31/16;C08B37/00;A01G1/04
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1.灰樹花253菌株粗多糖在制備抗禽流感H5N1病毒藥物上的應用，其特征是，所述灰樹花253菌株粗多糖由下述方法制得：

(1)加熱提取：取經液體發酵或固體發酵的灰樹花253菌株發酵全液或菌絲體或澄清液放于容器內，加入純凈水調整其pH值為8～12，置60～120℃下加熱100～240分鐘；

?(2)過濾：之后冷卻、以180～200目的篩網過濾灰樹花菌絲體，收集濾液，濾渣以其4～8倍體積的蒸餾水稀釋，重復上述操作1～2遍，再收集濾液；

(3)減壓濃縮：合并收集的濾液，在溫度50～70℃，壓力0.2～0.6Kg/cm²，真空度為0.02～0.06Mpa的條件下進行減壓濃縮，使濾液濃縮至原有體積的1/10～1/20；

(4)除色素：取濃縮后的提取液，用氨水調pH至6.0～8.0，于30～45℃下攪拌，按每10ml滴加1ml～2ml?10?%～30%的H₂O₂，進行脫色10～24h，得到淡黃色液體；?

(5)除小分子化合物：然后利用透析袋，截留分子量3000～5000以上，4℃～10℃條件下透析24h～48h，去除多余的H₂O₂、小分子化合物；

(6)除脂肪：取上述提取液，裝入索氏提取器,按1：0.5～1的比例加入石油醚，加熱回流提取2～6h,待冷卻后，棄去石油醚層，回收余下的提取液；

(7)醇析：在回收的提取液中，加入量為其體積4～8倍的95%醇溶液并不斷攪拌，攪拌速度為30～60r/min，10～20分鐘后，靜置24～48小時進行醇析；

(8)離心分離：醇析后棄上清液，沉淀物移入離心管中，以轉速為3000～5000r/min離心20～30min，離心后棄去上清液，收集離心沉淀物；

(9)收集物干燥：將上述收集的離心沉淀物，在50～70℃溫度條件下干燥36～48小時；?

(10)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，進行粉碎，經200目篩網過篩后即為灰樹花粗多糖；

其中，所述的灰樹花253菌株發酵全液是指灰樹花253菌株發酵液與菌絲體的集合體。

2.如權利要求1所述的灰樹花253菌株粗多糖在制備抗禽流感H5N1病毒上藥物的應用，其特征在于所述灰樹花253菌株發酵全液經分離獲得灰樹花258菌株菌絲體。

3.如權利要求1或2所述的灰樹花253菌株粗多糖在制備抗禽流感H5N1病毒上藥物的應用，其特征在于，所述灰樹花253菌株發酵全液通過以下步驟獲得：

（1）液體種子培養：采用500毫升三角瓶，每瓶裝200毫升液體培養基，將10%的灰樹花菌種以常規方法接種到裝有液體培養基的三角燒瓶內，調節pH為3-8，培養溫度為20-35℃，搖瓶轉速為80-280r/min，培養7-15天，即可得到灰樹花液體種子；

（2）發酵罐發酵：先將發酵罐中的培養基進行滅菌，滅菌壓力為0.1～0.2公斤/平方厘米，滅菌時間為1-2小時；當灰樹花液體種子pH值降至2.5-4時，將搖瓶中的灰樹花253菌株種子接種到50L發酵罐的培養基中，調整pH為5-8，培養溫度25-35℃，通氣量0.5-1.1vvm，攪拌轉速100-250r/min，培養7-30天，即可獲得灰樹花253菌株發酵全液。

4.如權利要求3所述的灰樹花253菌株粗多糖在制備抗禽流感H5N1病毒上藥物的應用，其特征在于，灰樹花253菌株液體發酵培養基以克/100毫升計是：地瓜淀粉1～3%?，葡萄糖1～5%，蛋白胨0.2～0.6%，酵母膏0.2～0.5%，硫酸鎂??0.1～0.3%，?磷酸二氫鉀?0.05～0.1%。