[發明專利]糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201310400058.0
• 申請日: 2013-09-04
• 公開（公告）號: CN104422764A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 謝愛武
• 申請（專利權）人: 深圳市艾瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

1.一種糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條，其特征在于，包括依次相互接觸的樣品墊、結合物墊、分析膜、吸水墊，底部設有襯墊，所述分析膜上設有檢測線與質控線；所述結合物墊中固定有苯硼酸標記物及熒光材料標記的用于檢測抗原的抗體，檢測線含有與待測樣品發生反應的抗體，質控線含有與苯硼酸標記物產生反應的抗體。

2.根據權利要求1所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條，其特征在于：所述依次相互接觸的樣品墊、結合物墊、分析膜、吸水墊相互具有1～2mm的重疊區域。

3.根據權利要求2所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條，所述分析膜設置于結合物墊及吸水墊的下方，所述樣品墊設置于所述結合物墊的上方。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條，其特征在于，所述檢測線與質控線間隔5mm。

5.一種權利要求1所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條的應用，其特征在于，其可以用于檢測生物樣品，檢測對象為全血、血清、血漿中糖蛋白類腫瘤標志物的含量檢測。

6.根據權利要求5所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條的應用，其特征在于，檢測方法為將樣品滴加至樣品墊上，從吸水墊一側借由虹吸作用使液體進行流動，當液體接觸檢測線與質控線之后，通過儀器讀取熒光強度的方式得出待測樣品的濃度。

7.一種權利要求1所述糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）苯硼酸標記物的制備：將熒光染料化合物分別用緩沖液稀釋，分別加入苯硼酸材料溶解液，攪勻，室溫反應至少1小時，通過凝膠柱進行分離純化，收集標記物，用緩沖液稀釋混勻后保存；

（2）樣品墊的制備：用纖維素膜作為樣品墊固相材料，用0.01%～0.5%聚乙二醇、1%～5%牛血清白蛋白、0.01%～0.05%表面活性劑的0.01～0.3M磷酸鹽緩沖液浸泡，所述緩沖液PH值為7.2～7.6，浸泡處理后，將樣品墊放入真空干燥箱內干燥后取出，真空密封備用；

（3）結合物墊的制備：用玻璃纖維素膜作為結合物墊固相材料，用含1%～5%牛血清白蛋白、0.1～2%聚乙二醇、0.5～2%蔗糖、0.01%～0.1%表面活性劑的0.01～0.1M?pH7.2磷酸鹽緩沖液稀釋磷光材料標記物，制成懸液，噴涂在玻璃纖維素膜上，將結合物墊放入真空干燥箱內干燥后取出，真空密封備用；

（4）分析膜的制備：用緩沖液稀釋檢測線和質控線所使用的抗體至適合濃度，采用噴膜機分別噴涂在分析膜的檢測線和質控線位置上，將噴膜后的分析膜放入真空干燥箱內，干燥后取出真空密封備用；

（5）吸水墊的制備：選用濾紙作為吸水墊固相材料，將其在干燥環境保存備用；

以上步驟（1）至步驟（5）沒有順序限制；

（6）成品試紙條的制備：按照反應順序，先將分析膜粘附在襯墊中間位置上，在分析膜上端粘附吸水墊，吸水墊在分析膜上方，二者重疊1～2mm；在分析膜下端粘附結合物墊，結合物墊在分析膜上方，二者重疊1～2mm；再在結合物墊下端粘貼樣品墊，樣品墊在結合物墊上方，二者重疊1～2mm；將襯墊以及上面粘貼的樣品墊、結合物墊、分析膜和吸水墊一同裁切成型即可。

8.根據權利要求7所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述抗體為抗糖蛋白類腫瘤標志物單克隆抗體、羊抗鼠IgG抗體。

9.根據權利要求7所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述襯墊由聚對苯二甲酸乙二醇酯材料制成。

10.根據權利要求7所述的糖蛋白類腫瘤標志物免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述苯硼酸材料為苯硼酸衍生物，所述苯硼酸衍生物有標記熒光染料的化學基團，所述熒光染料的激發光光譜范圍為390～420nm，發射光波長范圍為600～700nm。