[發明專利]圖像識別法細胞計數器校準方法

有效

• 申請號: 201310399802.X
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN103436439A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 朱耀輝;余海濱;趙光;李靜;楊紅
• 申請（專利權）人: 朱耀輝;趙光;余海濱;李靜;楊紅
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34
• 代理公司: 鄭州紅元帥專利代理事務所(普通合伙) 41117
• 代理人: 楊妙琴

??技術領域

本發明涉及一種生物醫學儀器校準方法，尤其涉及一種用于檢測活細胞數量的圖像識別細胞計器校準方法。

背景技術

細胞計數器作為一種計量設備，需要定期進行校準以保證測量的精密度。目前細胞計數器的校準無標準品，通常是由使用單位利用自制的活細胞制品監測，但由于細胞的種類、培養條件、存活率、懸液濃度制備及保存時間等條件限制，更為重要的是自制細胞數量和活性隨時間的不確定性使得目前尚不能很好的使用一種活細胞建立標準的生物學模型用于校準細胞計數器；目前細胞計數器每次校準需要制備樣品用細胞計數板法人工計數進行間接驗證細胞計數器測量的準確性，但無法評價細胞計數器測定不同大小細胞和細胞活率時的精密度，同時也無法評價細胞計數器系統內誤差和偏差，所以國內外的細胞計數器的準確性和精密性可能存在較大的偏差。

故制作標準的可重復性的“細胞”模型，并將其用于細胞計數器的校準就顯得尤為重要。

發明內容

為了解決目前細胞計數器無標準的可重復的“細胞”模型用于校準即無法評價細胞計數器測量不同大小細胞、不同細胞濃度和細胞活率時的精密度和無法評價細胞計數器系統內誤差的問題，本發明的目的是提供一種采用仿細胞校準板進行細胞計數器校準的圖像識別法細胞計器校準方法，該方法具評價細胞計數器在不同細胞濃度和細胞活率時的準確性并評價細胞計數器的系統誤差功能，同時具有時操作簡便、易行。

本發明的技術方案是以下述方式實現的：

一種圖像識別法細胞計數器校準方法，校準方法中使用專用的透明材質的仿細胞計數板作為細胞計數器的校準品，其仿細胞計數板是采用石英光掩模技術制備、具有能使細胞計數器識別的與真核細胞的直徑和活率相似的仿細胞的仿細胞計數板。

仿細胞計數板為玻璃或透明塑料材質，其上有兩個相同檢測區域，每個檢測區域面積至少為3mm×3mm；仿細胞計數板上、檢測區域有兩類圓：一類為透明圓環代表仿活細胞；另一類為不透明實心圓代表仿死細胞。

仿細胞計數板的檢測區域按1mm×1mm分成9個大區域，大區域之間的刻線寬度為9um，線深度為4um。

每個大區域中按0.25mm×0.25mm分成16個中區域，中區域之間的刻線寬度為6um，線深度為4um，16個中區域里有8個帶細胞圖案區域和8個空白區域、帶細胞圖案區與空白區域交替排列。

每個帶細胞圖案的區域按0.125mm×0.125mm分成4個小區域，區域之間線寬為4um，線深度為4um。

每個帶細胞圖案的區域按從左到右、從上到下順序原則標注漢字“一”～“十”序號分別標注十行橫向排列的活的或死的仿細胞和十行縱向排列的活的或死的仿細胞。

每個小區域中心間隔25um×25um，兩類仿細胞按直徑為5um、10um、15um、20um、25um的兩類圓從小到大，順序從左到右、從上到下原則排列。

4個小區域細胞圖案分成兩個仿活細胞圖案區域和兩個仿死細胞圖案區域，兩個仿活細胞圖案區域中心對稱，兩個仿死細胞圖案區域中心對稱，?每個仿活細胞圖案區域有1個直徑為25um仿活細胞、3個直徑為20um仿活細胞、5個直徑為15um仿活細胞、7個直徑為10um仿活細胞、9個5um直徑為仿活細胞；每個仿死細胞圖案區域的仿死細胞數量和直徑與每個仿活細胞圖案區域活細胞數量和直徑相同。

圖像識別法細胞計數器結構包括光源、計數片、調焦物鏡、感光芯片、數據線、控制器、圖像識軟件、顯示器。

細胞計數器和仿細胞計數板精密度評價為：

日內精密度：同一個仿細胞計數板連測5次，計算RSD（相對標準方差），RSD應達到5%——10%則為合格；

日間精密度：同一個仿細胞計數板不同日各測3次，計算RSD，RSD在5－15%以內則為合格；

批內精密度：是同一次測定的精密度，通常采用高、中、低三種濃度的同一樣品各7－10份，每種濃度的樣品所擬定的分析方法操作，一次開機后，一一測定，計算每種濃度樣品的RSD值，且所得RSD應在5%——10%則為合格；

批間精密度：是不同次測定的精密度，通常采用高、中、低三種濃度的同一樣品，每種濃度配制7－10份，按所擬定的分析方法操作，每天取出一份測定，計算每種濃度樣品的RSD值，RSD應控制在5－15%以內。