[發(fā)明專利]一種食品中沙門氏菌活菌的快速檢測試劑盒及使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310399019.3
• 申請日: 2013-09-04
• 公開（公告）號: CN103436623A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張毅
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種沙門氏菌PMA-LAMP檢測試劑盒，包括以下成分：

10×反應(yīng)緩沖液、Bst?DNA聚合酶、10?mM?dNTPs、100?mM?MgSO₄、40?mM?PMA，1000×SYBR?Green?I?熒光染料和陽性對照沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)株；

引物F3：5^，CGGCCCGATTTTCTCTGC?3^，；

引物B3：5^，CGGCAATAGCGTCACCTT?3^，；

引物FIP：5^，GCGCGGCATCCGCATCAATATGCCCGGTAAACAGATGAGT?3^，；

引物BIP：5^，GCGAACGGCGAAGCGTACTGTCGCACCGTCAAAGGAAC?3^，；

引物L(fēng)oop-F：5^，GGCCTTCAAATCGGCATCAAT?3^，；

引物L(fēng)oop-R：5^，GAAAGGGAAAGCCAGCTTTACG?3^，；

所述的10×反應(yīng)緩沖液配方：200?mM?Tris-HCl、100?mM?KCl、10?mM?(NH₄)₂SO₄、1.0%?m/v?Tritonx-100。

2.權(quán)利要求1所述沙門氏菌PMA-LAMP檢測試劑盒的使用方法，其步驟是：

PMA-LAMP反應(yīng)體系：在0.2?mL?PCR管中依次加入10×Thermopol?Reaction?Buffer?2.5μL，Bst聚合酶1μL，引物FIP和BIP終濃度為1.8?μM；引物F3和B3終濃度為0.2?μM；引物L(fēng)F和LB終濃度為1.0?μM，DNA模板和無RNA酶去離子水至25?μL，在60～65℃水浴中反應(yīng)60?min，在85℃水浴中溫浴10?min使酶失活；

引物F3：5^，CGGCCCGATTTTCTCTGC?3^，；

引物B3：5^，CGGCAATAGCGTCACCTT?3^，；

引物FIP：5^，GCGCGGCATCCGCATCAATATGCCCGGTAAACAGATGAGT?3^，；

引物BIP：5^，GCGAACGGCGAAGCGTACTGTCGCACCGTCAAAGGAAC?3^，；

引物L(fēng)oop-F：5^，GGCCTTCAAATCGGCATCAAT?3^，；

引物L(fēng)oop-R：5^，GAAAGGGAAAGCCAGCTTTACG?3^，；

所述的10×反應(yīng)緩沖液配方：200?mM?Tris-HCl、100?mM?KCl、10?mM?(NH₄)₂SO₄、1.0%?m/v?Tritonx-100。