[發明專利]牛羊腸毒血癥的D型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗的制備方法

有效

• 申請號: 201310398764.6
• 申請日: 2013-09-05
• 公開（公告）號: CN103463632A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 柴同杰;王方山;王海榮
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: A61K39/08
• 分類號: A61K39/08;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種牛羊腸毒血癥的D型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗的制備方法，其特征在于具體步驟如下:

1)將D型產氣莢膜梭菌菌種接種于5%綿羊血-1%葡萄糖-瓊脂平板上，37℃厭氧培養36小時復蘇；

2）挑取復蘇后的單個菌落接種于硫乙醇酸鹽流體培養基FT45℃厭氧增菌10h；將FT增菌培養液按照接種量5%體積比接種厭氧肉肝湯，43℃厭氧培養6h；取厭氧肉肝湯菌液4℃10000r/min離心15min，蔡氏濾器過濾取上清得到毒素溶液；

3）將毒素溶液用1M?NaOH調pH至7.2，然后加入甲醛使毒素溶液中甲醛濃度達到0.3%，充分振蕩混勻，置37℃96h滅活，間隔5-6h振搖一次，即得類毒素溶液；

4）將白油和Span-80按照94：6的體積比混合，再加入白油和Span-80混合液質量比2%的硬脂酸鋁溶化混勻，121℃高壓滅菌30分鐘即為油相；取類毒素溶液，加入Tween-80s使Tween-80s在類毒素溶液中濃度達到2%,混勻，即為水相；將油相與水相按體積比1：1的比例乳化，乳化液中加入硫柳汞使硫柳汞終濃度為0.01%，即得牛羊腸毒血癥的D型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗類毒素疫苗；

所述5%綿羊血-1%葡萄糖-瓊脂平板成分為：1克葡萄糖、3.8克豆粉瓊脂、5毫升綿羊血和100毫升去離子水。