[發(fā)明專利]包括1735G>C突變的CYP2D6基因片段、所編碼的蛋白質(zhì)片段及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310398136.8
• 申請日: 2013-09-04
• 公開（公告）號: CN103614388A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡劍平;胡國新;戴大鵬;耿培武;蔡杰
• 申請（專利權(quán)）人: 蔡劍平
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/11;C12Q1/68;C12N9/02
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標(biāo)代理有限公司 11012
• 代理人: 陳悅軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物學(xué)領(lǐng)域，涉及CYP2D6等位基因第1735位的單堿基突變。更具體地，本發(fā)明涉及包含該突變位點(diǎn)的核酸片段及其相應(yīng)編碼的蛋白質(zhì)片段、鑒定所述突變位點(diǎn)的試劑、檢測方法和鑒定該位點(diǎn)在指導(dǎo)用藥中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

細(xì)胞色素P4502D6（CYP2D6）是CYP酶家族重要的成員之一。其基因位于第22號染色體上，包括9個(gè)外顯子，基因全長9432bp（GenBank注冊號M33388，外顯子區(qū)位于第1620-5909位）。人體內(nèi)該細(xì)胞色素的量只占肝臟酶總量的2%～4%，卻參與臨床上20%～30%藥物的代謝，這樣藥物包括抗抑郁藥、抗心律失常藥、抗精神病藥、鎮(zhèn)痛藥、止咳藥、止吐藥、抗糖尿病藥及β受體阻滯藥等，研究其代謝多態(tài)性具有十分重要的臨床應(yīng)用價(jià)值（參見參考文獻(xiàn)1）。?

CYP2D6基因具有高度多態(tài)性。目前為止，NCBI?SNP數(shù)據(jù)庫中已經(jīng)收錄了超過300個(gè)突變位點(diǎn)。由CYP450國際命名委員命名的等位基因也已有150多個(gè)，另外還有多種新發(fā)現(xiàn)的突變型尚未被命名（http://www.cypalleles.ki.se/cyp2d6.htm）。每個(gè)等位基因都不同程度涉及點(diǎn)突變、缺失、插入、重排等，從而影響CYP2D6的活性，進(jìn)而影響對藥物的代謝活性，產(chǎn)生不同程度的藥物效應(yīng)。除去野生型CYP2D6*1外，目前研究較多且臨床意義較大的突變型主要包括以下7種：CYP2D6*2、*3、*4、*5、*10、*17、*41，其中人種分布最廣、研究最多、中國人群研究資料相對最豐富的突變型是CYP2D6*2（2850C>T；4180G>C）和CYP2D6*10（100C>T；4180G>C）（參見參考文獻(xiàn)1、2、3）。?

根據(jù)目前的臨床研究顯示，CYP2D6基因的這種多態(tài)性是造成CYP2D6酶活性在個(gè)體之間差異顯著的主要原因，攜帶不同CYP2D6基因型的個(gè)體間可引起藥物療效的極大差異，甚至產(chǎn)生嚴(yán)重的藥物毒副作用或治療不充分。因此，研究CYP2D6基因多態(tài)性對藥物療效的影響將對臨床合理用藥提供重要的科學(xué)依據(jù)（參見參考文獻(xiàn)3、4）。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供CYP2D6基因的新的單堿基突變位點(diǎn)，包含該突變位點(diǎn)的核酸片段、其編碼的蛋白質(zhì)片段及鑒定該突變位點(diǎn)在用藥指導(dǎo)中的應(yīng)用。?

本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供核酸片段，所述核酸片段包含對應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的第1735位的突變位點(diǎn)，且是SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列中的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸，其中第1735位的核苷酸是C；或者所述核酸片段包含對應(yīng)于SEQ?ID?NO.2的第482位的突變位點(diǎn)，且是SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸，其中第482位的核苷酸是C；或者所述核酸片段為上述核酸片段的反向互補(bǔ)序列。?

本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供與含有對應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的第1735位或?qū)?yīng)于SEQ?ID?NO.2的第482位的突變位點(diǎn)的等位基因片段或其反向互補(bǔ)序列全部或部分雜交的等位基因特異性寡核苷酸，其中SEQ?ID?NO.1的第1735位或SEQ?ID?NO.2的第482位的突變位點(diǎn)的核苷酸是C；所述等位基因片段是SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸或其反向互補(bǔ)序列。?

本發(fā)明的第三個(gè)方面是提供用于檢測和/或分析本發(fā)明的單堿基突變的試劑盒，所述試劑盒包含本發(fā)明的核酸片段或等位基因特異性寡核苷酸，或包含能夠作為引物擴(kuò)增所述單堿基突變但不包含該單堿基的核酸片段；所述單堿基對應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的第1735位或SEQ?ID?NO.2的第482位。?

本發(fā)明的第四個(gè)方面是提供本發(fā)明的核酸片段或寡核苷酸在檢測CYP2D6基因突變中的應(yīng)用，其中所述核酸片段或寡核苷酸用作探針或引物；或者本發(fā)明的核酸片段或寡核苷酸用于制備檢測CYP2D6基因突變的藥物的應(yīng)用；或者本發(fā)明的核酸片段或寡核苷酸用作檢測CYP2D6基因突變的檢驗(yàn)標(biāo)志物的應(yīng)用。?

本發(fā)明的第五個(gè)方面是提供一種用藥指導(dǎo)，包括檢測待測樣品中CYP2D6基因的對應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的第1735位或SEQ?ID?NO.2的第482位的單堿基突變；根據(jù)檢測到的突變，調(diào)整由CYP2D6代謝的藥物的給藥量。?