[發明專利]碳納米粒子修飾電極電化學發光測定博來霉素的方法

有效

• 申請號: 201310396240.3
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103439319A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 混旭;劉芳
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.碳納米粒子修飾電極電化學發光測定博來霉素的方法，其特征包括以下步驟：

a?將0.1~1.0?g聚乙烯醇溶解在10?ml水中制得均相溶液，然后放入微波爐（600?W）加熱15?min（分鐘）至溶液顏色改變，將上述溶液以13000?rpm離心30?min去除雜質，得碳納米粒子；將0.1~2.0克碳納米粒子與0.5?mL?63%的硝酸和0.5?mL二甲基甲酰胺混合后在100攝氏度下反應8小時（h）；

b?將200?μL?2?OD?DNA加入200?μL?1.0×10^-3?mol/L?Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS（二(2,2'-聯吡啶)?(2,2'-吡啶-4,4'-二碳酸)琥珀酰胺釕），室溫下振蕩6~18?h，隨后，在該溶液中加入100?μL?3?mol/L?醋酸鈉和2.0?mL?冷無水乙醇，溶液在-16?℃冷卻24?h，然后在12000轉速和-4?℃下離心30?min，沉淀物用1?mL冷乙醇清洗三次，除去未反應的Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS，得Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS標記的DNA探針（電化學發光探針）用1.0?mL?0.10?mol/L?磷酸緩沖溶液溶解；

c?金電極經1.0?μm，0.3?μm，0.05?μm的α-A1₂O₃拋光粉拋光后，用二次蒸餾水沖洗干凈，并在超聲波水浴中超聲5?min，用高純氮氣吹干，備用；將處理好的金電極浸入100?μL（10^-4?M）的巰基乙胺中，固定2~8?h（37℃）后，用磷酸緩沖溶液沖洗二次，取1?mL羧基化碳納米粒子溶液，加入N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）3.6?mg、1-（3-二甲氨基醛）-3-乙基二亞胺鹽酸鹽（EDC）7.2?mg，在37?°C下活化1?h，再將上述電極浸入其中，反應過夜，制得碳納米粒子修飾電極，利用DNA與探針與碳納米粒子修飾電極之間的靜電斥力和π-π堆積作用之間的競爭作用，得碳納米粒子修飾電極電化學發光生物傳感器。

2.利用權利要求1所制備的碳納米粒子修飾電極電化學發光生物傳感器測定博來霉素的方法，其特征包括以下步驟：

在100?μL電化學發光探針中加入不同濃度的博來霉素溶液和0.1?mM?Fe²⁺，然后將修飾電極浸入其中反應7?min，用10?mM的磷酸緩沖溶液（pH?7.4）沖洗電極三次，然后進行電化學發光測定，根據作用后電極表面電化學發光探針所產生電化學發光信號，對博來霉素進行定量檢測。

3.根據權利要求2所述的電化學發光測定具體為：采用三電極系統檢測，工作電極為金電極，對電極為鉑絲電極，參比電極為Ag/AgCl電極，參數設置為：高壓800?V，放大級數為3，控制電位為0-1.30?V。

4.根據權利要求1所述，其特征在于：?DNA部分序列為5'-CGCTTTAAAAAAAGTG-(CH₂)₆-NH₂-3'。

5.根據權利要求1所述，其特征在于：?DNA部分序列為3'末端為氨基修飾。