[發明專利]人尿路上皮癌特異性抗體及其應用

有效

• 申請號: 201310395225.7
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103592439A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 李翀;栗剛
• 申請（專利權）人: 李翀
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;C07K16/24;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

技術領域

本發明屬于腫瘤免疫學領域。具體地說本發明涉及一株抗人尿路上皮癌TNFRSF25的單克隆抗體DTUC1。該抗體能夠在生化、細胞核組織水平特異性識別人尿路上皮癌TNFRSF25。本發明還涉及一種雙抗夾心酶聯免疫吸附檢測人尿路上皮癌的方法。這種檢測方法中的固定相為B‐8抗體（購自Santa?Cruz?Biotechnology,Inc.），檢測抗體是本發明中的DTUC1，用于檢測尿液中腫瘤標記物TNFRSF25含量。?

背景技術

尿路上皮癌是指覆蓋尿路的上皮細胞發生的腫瘤，包括膀胱尿路上皮癌、輸尿管尿路上皮癌和腎盂尿路上皮癌，它們占泌尿系統腫瘤的絕大部分，其中膀胱尿路上皮癌占膀胱癌發生率的90%以上[1]。對尿路上皮腫瘤的診斷，膀胱鏡或輸尿管鏡加病理活檢是金標準，但由于膀胱鏡或輸尿管鏡為有創性檢查且敏感度不高，對尿路上皮腫瘤的早期診斷和術后監測幫助不大[2]。尿脫落細胞鏡檢是一種無創的檢查，特異度較高，但是敏感度較低，對于尿路上皮腫瘤的早期診斷和術后監測幫助有限[3]。人們一直在尋找一些無創的，敏感度和特異度均高的檢查指標來輔助尿路上皮腫瘤的早期診斷和術后監測[4]。?

TNFRSF25又名“死亡受體DR3”（Death?Receptor3）發現于1996年,為腫瘤壞死因子受體超家族（TNFR?super?family）中的一員,基因定位在lp36.3，其編碼產物為一種11型跨膜蛋白，大小為417個氨基酸，與該家族中其他蛋白類似，其胞質區同樣具有一段有蛋白水解功能的氨基酸殘基段，即死亡結構域（Death?domain），并且與TNFR‐1以及Fas存在高度同源性，通過此區域可使得凋亡信號向通路下游繼續傳遞，繼而啟動調亡而TNFRSF25同時還可激活NF‐κB的表達，從而使NF‐κB進入細胞核內,激活轉錄[5]。因其被發現時主要分布于淋巴組織中，如脾臟、胸腺以及外周血淋巴細胞，包括淋巴細胞、NK?細胞、巨噬細胞等中[6‐8]，故對其的最初研究多為在免疫調節機制中的作用，并且己證實TNFRSF25可以促進多種炎癥性疾病的發生及發展，如炎癥性腸病、關節炎等[8‐11]。隨著研究的深入，逐漸證實TNFRSF25在多種腫瘤組織中亦有分布[12‐15]。但在尿路上皮癌中，TNFRSF25的高表達鮮有報道。?

在尿路上皮癌的診斷中，早期發現和預后判斷對臨床治療顯得極為重要。近年來用于臨床的分子標記，如核基質蛋白、端粒酶和微衛星不穩定性等，其靈敏度或特異性不能令人滿意。所以，尋求有效、簡便、快速、靈敏的尿路上皮癌的高通量診斷方法是非常必要的。?

發明內容

本發明利用人尿路上皮癌組織勻漿免疫小鼠，獲得雜交瘤細胞。用ELISA的方法篩選到一株能與人尿路上皮癌組織高度特異結合的抗體DTUC1。免疫組織化學和流式細胞術證實，DTUC1抗體與人尿路上皮癌組織和尿路上皮癌細胞系5637、UMUC3、SW780、J82、T24和RT4呈強陽性反應，而與人正常尿路組織和其它非尿路上皮癌細胞無交叉反應。?

本發明還涉及一種雙抗夾心酶聯免疫吸附檢測人尿路上皮癌的方法。這種檢測方法中的固定相為B‐8抗體（購自Santa?Cruz?Biotechnology,Inc.）檢測抗體是本發明中的DTUC1。?

本發明利用DTUC1抗體制備成診斷試劑，即將B‐8抗體（購自Santa?Cruz?Biotechnology,Inc.）作為固定相，DTUC1抗體檢測尿液中腫瘤標記物TNFRSF25含量。?

本發明的創新點在于：（1）研制了一株抗人尿路上皮癌的鼠單克隆抗體DTUC1，該組抗體能特異性地結合人尿路上皮癌組織；（2）開發了一種高靈敏度的雙抗夾心酶聯免疫吸附方法，用于人尿液中尿路上皮癌腫瘤標記物TNFRSF25的檢測。?

發明詳述?

本發明提供了一個新的抗人尿路上皮癌TNFRSF25的單克隆抗體的雜交瘤細胞，及其分泌的單克隆抗體DTUC，DTUC1識別TNFRSF25的抗原表位。DTUC1抗體與人尿路上皮癌組織及人尿路上皮癌細胞系5637、UMUC3、SW780、J82、T24和RT4呈強陽性反應，而與人正常尿路組織和其它非尿路上皮癌細胞無交叉反應。本發明還提供了包含單克隆抗體DTUC1體外診斷試劑盒和使用單克隆抗體DTUC1檢測尿液中尿路上皮癌腫瘤標記物含量的方法。?

本發明的另一個目的是提供一種用于檢測或治療人尿路上皮癌的試劑盒，其包含本發明上述的抗體。?