[發(fā)明專利]一種致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的抗高血壓藥物篩選模型的構(gòu)建及應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310393735.0
• 申請(qǐng)日: 2013-09-03
• 公開（公告）號(hào): CN103555650A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許激揚(yáng);卞筱泓;許娟;沃龍飛;趙剛剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，有關(guān)一種內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型建立，特別是同型半胱氨酸聯(lián)合去甲腎上腺素致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的抗高血壓天然藥物的篩選方法。?

背景技術(shù)

同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)是一種含巰基的氨基酸，是甲硫氨酸和半胱氨酸代謝過程中的一個(gè)重要中間產(chǎn)物，其本身不參加蛋白質(zhì)的合成。同型半胱氨酸在正常人血漿中的濃度通常為5.0μmol·L^-1～16μmol·L^-1。高同型半胱氨酸血癥是一種以血漿中HCY濃度升高為主的疾病，輕度、中度和重度高同型半胱氨酸血癥的血漿濃度分別為16μmol·L^-1～30μmol·L^-1、31μmol·L^-1～100μmol·L^-1和大于100μmol·L^-1，少數(shù)病人血漿中的HCY濃度可達(dá)到500μmol·L^-1以上，發(fā)展成為高同型半胱氨酸尿癥。大量流行病學(xué)調(diào)查和臨床病例研究已證實(shí)，血液中同型半胱氨酸的濃度升高是獨(dú)立于其它已知危險(xiǎn)因素的致動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)因子。?

有研究發(fā)現(xiàn)血液中HCY濃度升高可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，并能誘導(dǎo)或抑制內(nèi)皮細(xì)胞中多種基因的表達(dá)。高同型半胱氨酸血癥誘發(fā)心血管疾病的主要作用機(jī)制為氧化應(yīng)激機(jī)制，HCY在自身氧化過程中，可產(chǎn)生超氧化物陰離子、過氧化氫及羥基等活性氧物質(zhì)(reactive?oxygen?species，ROS)，其可與NO反應(yīng)加速NO失活，降低NO生物利用度；HCY本身也能與NO反應(yīng)，為降解HCY的重要途徑之一，直接導(dǎo)致NO濃度降低，使內(nèi)皮細(xì)胞明顯受損傷；HCY還能使低密度脂蛋白自身氧化，生成氧化修飾低密度脂蛋白(oxidized?low?density?lipo-protein，OX-LDL)，而后者可被巨噬細(xì)胞攝取并轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的進(jìn)一步損傷，同時(shí)可影響一氧化氮合酶(nitric?oxide?synthase，NOS)的表達(dá)進(jìn)一步使NO合成減少。?

去甲腎上腺素(Norepinephrine，NA)是腎上腺素去掉N-甲基后形成的物質(zhì)，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上也屬于兒茶酚胺。它既是一種神經(jīng)遞質(zhì)，主要由交感節(jié)后神經(jīng)元和腦內(nèi)腎上腺素能神經(jīng)末梢合成和分泌，是后者釋放的主要遞質(zhì)；也是一種激素，由腎上腺髓質(zhì)合成和分泌，但含量較少。循環(huán)血液中的去甲腎上腺素主要來自腎上腺髓質(zhì)。血管內(nèi)皮細(xì)胞所處的環(huán)境中，NA濃度較高，血管內(nèi)皮細(xì)胞受到NA調(diào)節(jié)的同時(shí)，也能夠滅活NA。血管內(nèi)皮細(xì)胞攝入NA后，在兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(catechol-O-methyltransferase，COMT)和單胺氧化酶(monoamine?oxidase，MAO)的作用下分別形成間甲去甲腎上腺素(normetanephrine)和3-甲氧-4-羥扁桃醛(3，4-dihydroxyphenylglycoaldehyde，DOPGAL)，后者再經(jīng)醛脫氫酶(aldehyde?dehydrogenase，ADH)和醛還原酶(aldehyde?reductase，ADR)催化形成3-甲氧-4-羥扁桃酸(3-methoxy-4-hydroxymandelic?acid，VMA)和3-甲氧-4-羥苯乙二醇(3-methoxy-4-hydroxyphenylethylene?glycol，MOPEG)。?

COMT是血管內(nèi)皮細(xì)胞滅活去甲腎上腺素等兒茶酚胺類物質(zhì)的主要途徑，當(dāng)NA等兒茶酚胺類物質(zhì)在細(xì)胞中過度積累濃度過高時(shí)，兒茶酚胺類物質(zhì)中含有的鄰苯酚基團(tuán)能夠發(fā)生自養(yǎng)化或催化氧化過程，生成醌及半醌類物質(zhì)，同時(shí)產(chǎn)生氧自由基，細(xì)胞內(nèi)的氧自由基能夠?qū)?xì)胞膜產(chǎn)生損害。在COMT的存在下，以S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-Adenosyl-L-methionine，SAM)為甲基供體，可將兒茶酚胺中的鄰苯酚基團(tuán)甲基化，這是血管內(nèi)皮細(xì)胞滅活兒茶酚胺類物質(zhì)的始動(dòng)反應(yīng)，同時(shí)SAM轉(zhuǎn)化為S-腺苷-L-同型半胱氨酸(S-Adenosyl-L-homocysteine，SAH)，其在水解酶的作用下水解為HCY。在高同型半胱氨酸血癥等情況下，細(xì)胞內(nèi)的HCY濃度較高，是水解反應(yīng)向逆反應(yīng)方向進(jìn)行，SAH濃度升高，SAH是COMT的非競爭性抑制劑，抑制COMT對(duì)兒茶酚胺類物質(zhì)的甲基化反應(yīng)，從而使含鄰苯酚基團(tuán)的兒茶酚胺類物質(zhì)積累，產(chǎn)生氧自由基損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。?