[發明專利]大鯢黏液蛋白、制備方法及在化妝品中的應用有效

申請號：	201310393629.2	申請日：	2013-09-03
公開（公告）號：	CN103613654A	公開（公告）日：	2014-03-05
發明（設計）人：	李偉;佟長青;曲敏;金橋	申請（專利權）人：	張家界（中國）金馳大鯢生物科技有限公司
主分類號：	C07K14/46	分類號：	C07K14/46;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22;A61K8/64;A61Q19/00;A61P17/00
代理公司：	大連非凡專利事務所 21220	代理人：	閃紅霞
地址：	427400 ***	國省代碼：	湖南;43
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摘要：
搜索關鍵詞：	大鯢黏液蛋白制備方法化妝品中的應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種大鯢黏液蛋白及制備方法，尤其是一種具有凝集血紅細胞特性的大鯢黏液蛋白、制備方法及在化妝品中的應用。

背景技術

大鯢（Andrias?davidianus）是我國特有的珍稀特產，屬國家二類保護動物。主要分布于長江中上游、珠江中上游及漢水上游的溪流中。隨著養殖規模的發展，大鯢資源的精深加工利用成為一個關系大鯢產業持續發展的緊迫課題。大鯢體表無鱗多皮膚腺，在生長過程中不斷分泌黏液，內含多種活性物質。?如Guo等人在《Z.?Naturforsh》上發表了從大鯢黏液中提取出的磷脂酶A₂[Z.?Naturforsh,?67c,?86-92(2012)]；王立峰等人從大鯢黏液中分離出抗菌肽（《中國生化藥物雜志》，2011年，第34卷第4期，269-272頁）；馮敘橋等鑒定了從大鯢黏液中制備的糖肽結構（《食品工業科技》，2012年，第33卷第6期，128-131頁）。迄今為止，還沒有以大鯢黏液為原料，制備具有凝集血紅細胞特性的大鯢黏液蛋白的相關報道。

發明內容

本發明是為了解決現有技術所存在的上述技術問題，提供一種具有凝集血紅細胞特性的大鯢黏液蛋白、制備方法及在化妝品中的應用。

本發明的技術解決方案是：一種大鯢黏液蛋白，其特征在于分子量為17?000道爾頓，含兩個亞基8500道爾頓，所述亞基含有77個氨基酸殘基；N末端為：纈氨酸-甘氨酸-酪氨酸-蘇氨酸-纈氨酸-甘氨酸-丙氨酸-蘇氨酸-脯氨酸-甲硫氨酸-。

所述大鯢黏液蛋白的氨基酸含量（摩爾/100摩爾）為：天冬氨酸和天冬酰胺4.76%，?蘇氨酸7.05%，絲氨酸5.62%，谷氨酰胺和谷氨酸5.25%，脯氨酸9.02%，甘氨酸17.88%，丙氨酸4.83%，纈氨酸7.16%,?異亮氨酸7.14%,?亮氨酸?8.25%，酪氨酸5.26%,?苯丙氨酸?5.27%?組氨酸?1.79%，?精氨酸?2.07%，甲硫氨酸1.,32%，賴氨酸7.22%。

一種上述大鯢黏液蛋白的制備方法，其特征在于依次按如下步驟進行：

a.?收集大鯢黏液，將大鯢黏液在0~10℃時進行勻漿，向勻漿中加入1~3倍體積pH?7~8含有0.15?M?NaCl的0.01~0.1M?Tris-HCl緩沖液，置于4℃過夜，5000g離心20?min，收集上清；

b.??向所收集上清中加入(NH₄)₂SO₄至80%飽和濃度，靜置過夜后，5000g離心20?min，收集沉淀，透析、凍干，得大鯢黏液凍干粉；

c.?用pH?6-9、0.01-0.1?M?Tris-HCl緩沖液溶解大鯢黏液凍干粉，加入到交聯的卵黏白蛋白-豬胃黏蛋白（3：1）親和層析上，先用pH?6-9、0.01-0.1?M?Tris-HCl緩沖液清洗，再用1.5?M?NaCl溶液洗脫，收集NaCl洗脫液，透析凍干；

d.將凍干粉溶于pH?6-9、0.01-0.1?M?Tris-HCl沖液中，再加到分子篩層析

Sephadex?G-100?(1.8×98cm)?上，收集具有OD₂₈₀吸收的層析峰，得大鯢黏液蛋白。

一種大鯢黏液蛋白在化妝品中的應用。

所述大鯢黏液蛋白在改善皮膚毛細管血管擴張癥化妝品中的應用。

本發明是以大鯢黏液為原料所制備的大鯢黏液蛋白，該大鯢黏液蛋白質具有凝集血紅細胞活性、抑制血管內皮生長因子受體I激酶以及促進細胞生長等作用，所制備的化妝品，可降低毛細血管通透性，有效改善皮膚毛細管血管擴張癥（俗稱紅血絲）。

附圖說明

圖1是本發明實施例的大鯢黏液蛋白SDS聚丙酰胺凝膠電泳圖。

圖2是本發明實施例的大鯢黏液蛋白凝集血紅細胞活性效果圖。