[發明專利]用重組細胞合成長鏈多不飽和脂肪酸

有效

• 申請號: 201310392524.5
• 申請日: 2005-04-22
• 公開（公告）號: CN103451246B
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 蘇林德爾·帕爾·辛格;斯坦利·蘇雷什·羅伯特;彼得·戴維·尼科爾斯;蘇珊·艾琳·艾利斯·布萊克本;周雪榮;詹姆斯·羅伯遜·皮特里;艾倫·格雷厄姆·格林
• 申請（專利權）人: 聯邦科學技術研究組織
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;A23K20/158;A61K31/557;A61P9/14;A61P29/00;A61P19/02;A61P11/06;A61P17/06;A61P19/10;A61P13/12;A61P13/04;A61P35/00;A61P3/10
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司72002
• 代理人: 左路,林曉紅

1.產生長鏈多不飽和脂肪酸的方法，所述方法包括培養重組細胞，其中所述重組細胞具有多于一種的異源多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼以下的酶：

a)Δ6去飽和酶、Δ6延長酶和Δ5去飽和酶；或

b)Δ5/Δ6雙功能去飽和酶和Δ6延長酶；

其中所述多于一種的多核苷酸與一種或多種能指導所述多核苷酸在細胞內表達的啟動子可操縱地連接，且其中至少一種去飽和酶能作用于脂酰輔酶A底物，且其中所述重組細胞的總脂肪酸包含至少1.5％的二十碳五烯酸，且其中所述重組細胞是植物細胞或酵母細胞。

2.產生包含長鏈多不飽和脂肪酸的油的方法，所述方法包括從重組細胞提取油，其中所述重組細胞具有多于一種的異源多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼以下的酶：

a)Δ6去飽和酶、Δ6延長酶和Δ5去飽和酶；或

b)Δ5/Δ6雙功能去飽和酶和Δ6延長酶；

其中所述多于一種的多核苷酸與一種或多種能指導所述多核苷酸在細胞內表達的啟動子可操縱地連接，且其中至少一種去飽和酶能作用于脂酰輔酶A底物，且其中從所述重組細胞提取的油的總脂肪酸包含至少1.5％的二十碳五烯酸，且其中所述重組細胞是植物細胞或酵母細胞。

3.權利要求1的方法，其中所述細胞來自植物種子。

4.權利要求2的方法，其中所述細胞來自植物種子。

5.權利要求3或4的方法，其中所述植物是油籽植物或所述種子是油籽。

6.權利要求3或4的方法，其中至少一種啟動子是種子特異性啟動子。

7.權利要求1或2的方法，其中所述多核苷酸編碼的酶還包括至少一種Δ5延長酶，其在細胞內催化二十碳五烯酸轉化為二十二碳五烯酸。

8.權利要求1或2的方法，其中所述細胞能夠合成二十二碳五烯酸。

9.權利要求8的方法，其中所述細胞能夠從亞油酸、γ-亞麻酸或花生四烯酸或它們的任一組合或混合物合成二十二碳五烯酸。

10.權利要求1或2的方法，其中所述細胞能夠合成二十二碳六烯酸。

11.權利要求10的方法，其中所述細胞能夠從亞油酸、γ-亞麻酸或花生四烯酸或它們的任一組合或混合物合成二十二碳六烯酸。

12.權利要求1或2的方法，其中所述細胞能夠從亞油酸產生二十碳五烯酸。

13.權利要求4的方法，其中通過壓榨所述種子從所述種子提取所述油。

14.權利要求2的方法，其中在提取之后純化所述油。

15.權利要求14的方法，其中使用強堿通過水解處理所述油以便釋放游離脂肪酸。

16.權利要求14的方法，其中處理所述油以制備藥物組合物。

17.通過權利要求1或2的方法產生的長鏈多不飽和脂肪酸。

18.通過權利要求2的方法產生的包含長鏈多不飽和脂肪酸的油。

19.組合物，其包含通過權利要求1或2的方法產生的長鏈多不飽和脂肪酸以及合適載體。

20.包含通過權利要求1或2的方法產生的長鏈多不飽和脂肪酸的飼料。

21.通過權利要求1或2的方法產生的長鏈多不飽和脂肪酸在制備用于治療或預防可從長鏈多不飽和脂肪酸獲益的疾病的藥物中的用途。

22.產生合成長鏈多不飽和脂肪酸的重組細胞的方法，所述方法包括向植物細胞或酵母細胞內引入多于一種的異源多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼以下的酶：

a)Δ6去飽和酶、Δ6延長酶和Δ5去飽和酶；或

b)Δ5/Δ6雙功能去飽和酶和Δ6延長酶；

其中所述多于一種的多核苷酸與一種或多種能指導所述多核苷酸在細胞內表達的啟動子可操縱地連接，且其中至少一種去飽和酶能作用于脂酰輔酶A底物，且其中包含多于一種異源多核苷酸的細胞的總脂肪酸包含至少1.5％的二十碳五烯酸。

23.產生轉基因種子的方法，所述方法包括：

i)向植物細胞內引入一種或多種異源多核苷酸，所述多核苷酸編碼：

a)Δ6去飽和酶、Δ6延長酶和Δ5去飽和酶；或

b)Δ5/Δ6雙功能去飽和酶和Δ6延長酶；

其中所述一種或多種多核苷酸與一種或多種能指導所述多核苷酸在種子內表達的啟動子可操縱地連接，且其中至少一種去飽和酶能作用于脂酰輔酶A底物，由此產生重組細胞，

ii)培養所述重組細胞以產生植物，和

iii)回收所產生的植物的種子，其中所述種子的總脂肪酸包含至少1.5％的二十碳五烯酸。