[發明專利]一種CD38納米抗體及應用

有效

• 申請號: 201310392116.X
• 申請日: 2013-09-02
• 公開（公告）號: CN103421115A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 萬亞坤;孫燕燕;王平艷
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/21;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 江蘇永衡昭輝律師事務所 32250
• 代理人: 王斌

技術領域

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，涉及一種針對于CD38的納米抗體。

背景技術

人CD38分子是在20世紀80年代早期由Reinnerz等用單克隆抗體的方法鑒定出來的,定名為T10,最初被認為是一種活化抗原,主要用于白細胞分類及表型鑒定。CD38分子表達與分布相當廣泛,主要表達在不成熟的造血細胞和活化的淋巴樣細胞,在骨骼肌、心肌、氣道平滑肌和子宮平滑肌CD38分子也有表達。尤其是在淋巴細胞中表達的特點,表明它可能在細胞的某個成熟階段參與細胞生長與分化的調節,所以在慢性淋巴細胞白血病中CD38分子有獨立的預測價值。同時CD38分子可以作為反映類風濕性關節炎病情活動的有效指標,CD38分子在CD8+細胞上的表達可以作為殘留病毒復制的指標。CD38分子自身免疫反應性糖尿病的診斷指標,并可用于艾滋病及巨細胞病毒的檢測及系統性紅斑狼瘡的病情監測。

目前市場上用于檢測CD38的試劑盒主要是“白細胞分化抗原CD38檢測試劑盒”(流式細胞儀法-FITC)的工作原理主要通過FITC熒光素標記的抗CD38單克隆抗體來實現的，但是這種傳統意義上的抗體穩定性差、靈敏度低、生產成本高，所有因素均限制了對于CD38的檢測。1993年比利時科學家首次在Nature報道：在駱駝血液中的抗體，有一半沒有輕鏈，而且更讓人驚喜的是，這些缺失輕鏈的“重鏈抗體”能像正常抗體一樣與抗原等靶標緊密結合，另外不像scFv那樣互相粘連，甚至聚集成塊。這種抗體只包含一個重鏈可變區和兩個常規的CH2與CH3區，更重要的是單獨克隆并表達出來的VHH區具有很好的結構穩定性與抗原結合活性，分子量只是普通抗體的1/10，所以VHH也稱Nanobody（納米抗體）；與此同時納米抗體化學性質也更加靈活，穩定性好，可溶性高，表達容易且容易獲得，容易偶聯其他分子，因此應用納米抗體技術研發CD38檢測試劑具有廣闊的前景。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的技術問題是提供一種針對CD38表位的納米抗體，同時提供該納米抗體的編碼序列及該納米抗體在制備檢測的應用。

技術方案：為實現上述目的，本發明的第一方面，提供了一種CD38的納米抗體的VHH鏈，包括框架區FR和互補決定區CDR，所述框架區FR選自下組的FR的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：1所示的FR1，SEQ?ID?NO：2所示的FR2，SEQ?ID?NO：3所示的FR3，SEQ?ID?NO：4所示的FR4；或SEQ?ID?NO：5所示的FR1，SEQ?ID?NO：6所示的FR2，SEQ?ID?NO：7所示的FR3，SEQ?ID?NO：8所示的FR4；

所述互補決定區CDR選自下組的CDR的氨基酸序列：

SEQ?ID?NO：9所示的CDR1，SEQ?ID?NO：10所示的CDR2，SEQ?ID?NO：11所示的CDR3；或SEQ?ID?NO：12所示的CDR1，SEQ?ID?NO：13所示的CDR2，SEQ?ID?NO：14所示的CDR3；

優選地，所述的CD38的納米抗體的VHH鏈，它具有SEQ?ID?NO：15和SEQ?ID?NO：16所示的氨基酸序列。

本發明第二方面，一種CD38納米抗體，它針對CD38表位的納米抗體，包括兩條具有SEQ?ID?NO：15和SEQ?ID?NO：16所示氨基酸序列的VHH鏈。

本發明第三方面，提供了一種DNA分子，它編碼選自下組的蛋白質：本發明所述的CD38的納米抗體的VHH鏈，或本發明所述的CD38納米抗體。

優選地，所述的DNA分子，其特征在于，它具有選自下組的DNA序列：SEQ?ID?NO：17和SEQ?ID?NO：18

本發明的第四方面，提供了一種表達載體，它含SEQ?ID?NO：17和SEQ?ID?NO：18

所示的核苷酸序列。

本發明的第五方面，提供了一種宿主細胞，其特征在于，它含有權利要求6所述的表達載體。

本發明的第六方面，提供了本發明所述的CD38納米抗體用于檢測CD38的用途。

有益效果：與現有技術相比，本發明的優點如下：本發明將CD38抗原胞外段多肽人工合成，并隨之免疫新疆雙峰駝，隨后利用該駱駝外周血淋巴細胞建立了針對于CD38的納米抗體基因庫，試驗中將CD38多肽偶聯在酶標板上，以此形式的抗原利用噬菌體展示技術篩選免疫性的納米抗體基因庫（駱駝重鏈抗體噬菌體展示基因庫），從而獲得了針對CD38特異性的納米抗體基因，將此基因轉至大腸桿菌中，從而建立了能在大腸桿菌中高效表達的納米抗體株。

附圖說明