[發(fā)明專利]一種區(qū)別鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的PCR-RFLP方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310391796.3
• 申請日: 2013-09-02
• 公開（公告）號: CN103409562A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬春和;黃瑜;陳紅梅;施少華;程龍飛;傅光華;傅秋玲;潘異哲
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種區(qū)別鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）提取鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒基因組DNA；

（2）用引物P1和P2同時對鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到相應(yīng)的NS基因片段；

（3）取PCR產(chǎn)物經(jīng)EcoRⅠ酶切后進(jìn)行RFLP分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的區(qū)別鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述的步驟（2）的擴(kuò)增引物P1和P2的序列為：

上游引物P1：5’-?CAAAATAAGACCGTGACT?-3’，

下游引物P2：5’-?ACAGGAGTAGGTTCAATACAAACA?-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的區(qū)別鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述的步驟（2）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)膠回收大小為810bp。

4.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的區(qū)別鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述的步驟（3）EcoRⅠ酶切位點(diǎn)位于番鴨細(xì)小病毒基因組NS基因序列的973位，番鴨細(xì)小病毒可被EcoRⅠ酶切后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測片段為2段，大小為530bp和280bp；而鵝細(xì)小病毒基因組NS基因中沒有EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，鵝細(xì)小病毒經(jīng)EcoRⅠ酶切后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測片段大小不變。