[發明專利]一種定量檢測樣品中小分子化合物的測試條及方法

在審

• 申請號: 201310391061.0
• 申請日: 2013-08-30
• 公開（公告）號: CN104422765A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 胡小龍;丁國榮
• 申請（專利權）人: 上海八通生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/566
• 分類號: G01N33/566;G01N33/577
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;劉真真

技術領域

本發明涉及檢測領域。具體地，本發明涉及一種檢測樣品中小分子化合物的測試條及方法。

背景技術

免疫層析檢測技術（immunochromatographic?test）又稱為免疫測流檢測（lateral?flow?immunoassay，LFIA)，是80年代興起的一項快速檢測技術。經過多年的發展，此項技術已經廣泛應用于臨床診斷，毒品檢測和食品安全等領域。

檢測大多數小分子化合物，通常采用競爭抑制法來檢測。在免疫層析方法中，將小分子物質的完全抗原固定于硝酸纖維膜上的檢測區(固相抗原)，待檢樣品溶液中的小分子物質(游離抗原)與固相抗原競爭結合膠體金或彩色乳膠微球標記的抗小分子物質的單克隆抗體(標記抗體)。如果待檢樣品中含有的小分子物質，將抑制標記抗體與固定抗原的結合，抑制在硝酸纖維素膜的檢測區形成色帶。測定后檢測區如果形成色帶，則結果為陰性，待測樣品不含待測小分子物質；反之，不形成色帶，則結果為陽性，檢測樣品含有待測小分子物質。

由于膠體金或彩色乳膠微球標記檢測是通過肉眼來判別結果，目前以膠體金或彩色微球標記的檢測方法只能作為一種定性或半定量的檢測。長期以來，人們嘗試使用閱讀儀器來對免疫層析檢測條進行定量，但是，由于膠體金或彩色乳膠微粒是以顏色的深淺作為檢測的信號，定量檢測的準確度和靈敏度都難以達到要求，也有一些以磁性微粒或普通的熒光微球作為標記，通過檢測磁性或熒光的強弱來實現定量，取得了較好的效果。但是仍然存在一些問題。主要是免疫層析檢測的材料中硝酸纖維膜等均會在激發光作用下發出不同程度的熒光，同時檢測樣本如血液、尿樣及唾液等均含有蛋白、核酸、糖類均具有熒光效應，因此而導致檢測的背景較高，影響檢測結果的準確性。

因此，本領域需要開發快速、準確、高效、簡便地定量檢測小分子化合物化合物的方法。

發明內容

本發明的目的就是提供一種定量檢測樣本中小分子化合物的方法，快速、高效、簡便、準確。

在本發明的第一方面，提供一種測試條，包括樣品墊、結合墊、反應膜、吸收墊、和背襯，所述反應膜上設置檢測區和質控區，所述結合墊上包含抗體復合物，所述抗體復合物包含熒光乳膠微粒以及小分子化合物抗體，所述小分子化合物抗體偶聯于所述熒光乳膠微粒。

在另一優選例中，所述小分子化合物的分子量為1-10000Da。

在另一優選例中，所述小分子化合物為毒品和精神類藥品，包括但不限于：海洛因、嗎啡、安非他明、甲基安非他明、MDMA、氯胺酮、可卡因、杜冷丁、芬太尼、曲馬多、大麻類、丁丙諾啡、美沙酮、可待因、咖啡因、麻黃堿、偽麻黃堿、安定、三唑侖、BZO、巴比妥、三環類抗憂郁藥物。

在另一優選例中，所述小分子化合物為食品中的有害物質，包括但不限于：鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、三聚氰胺、孔雀石綠、蘇丹紅、黃曲霉素B1、黃曲霉素M1、有機磷、除蟲劑、除草劑，各種激素如孕酮、雌三醇、睪丸酮等。

在另一優選例中，所述小分子化合物為食品中殘留的抗生素，包括但不限于：青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林、頭孢、慶大霉素、四環素、磺胺類抗生素、呋喃類抗生素。

在另一優選例中，所述熒光乳膠微粒為鑭系金屬和/或鑭系金屬螯合物包被的乳膠微粒。

在另一優選例中，所述結合墊上還包含兔IgG或鼠IgG。

在另一優選例中，所述質控區包含羊抗兔IgG或羊抗鼠IgG。

在另一優選例中，所述檢測區包含小分子化合物與載體蛋白的偶聯物。

在另一優選例中，所述載體蛋白為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白。

本發明的第二方面，提供一種檢測試劑盒，包括：

(a)測試條，所述測試條包括樣品墊、結合墊、檢測區、反應膜、質控區、吸收墊、和背襯；

(b)抗體復合物，所述抗體復合物包含熒光乳膠微粒以及小分子化合物抗體，所述小分子化合物抗體偶聯于所述熒光乳膠微粒；和

(c)容器。

本發明的第三方面，提供第一方面所述的測試條的用途，用于制備檢測飲用水、飲料、全血、血漿、血清、尿液、汗液、淚液或唾液中小分子化合物的試劑盒。

本發明的第四方面，提供一種檢測小分子化合物的方法，包括步驟：

(1)將待測物樣品加至第一方面所述的測試片的樣品墊；

(2)采用時間分辨熒光免疫層析方法測量所述測試片的檢測區的熒光強度及質控區的熒光強度，從而確定小分子化合物是否存在，或從而換算為小分子化合物的含量。