[發明專利]以鹽類作為沉淀劑用于蛋白質結晶篩選的試劑盒

有效

• 申請號: 201310390423.4
• 申請日: 2013-08-30
• 公開（公告）號: CN103436591A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 尹大川;劉悅;周伯儒;郭云珠;張辰艷;陳瑞卿;陶浩然;黃林軍
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/37;C12Q1/30;C12Q1/42;C12Q1/40;G01N33/68
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 顧潮琪

技術領域

本發明涉及一種用于蛋白質結晶條件篩選的96條件鹽類試劑盒。

背景技術

目前，對于蛋白質結晶條件的篩選，首要選擇的鹽類篩選試劑盒為Hampton?Research公司的SaltRx-HT（96條件）鹽類篩選試劑盒，具體成分見表1。它包括兩部分：鹽與pH矩陣緩沖區。鹽是唯一利用的主要結晶試劑(沉淀劑)，而結晶鹽濃度、pH值的鹽的不同選擇則是基于數據挖掘生物大分子結晶數據庫（BMCD）和其他結晶數據庫、結晶的報道文學,以及Hampton結晶實驗室的研究工作，在此大量工作的基礎上分析得到：多達35%的蛋白質結晶試劑盒涉及以鹽作為主要結晶試劑。鹽主要包括鈉鹽、銨鹽、鎂鹽、鉀鹽、酒石酸鹽等，其濃度范圍從0.4M到6M；緩沖液僅僅包括3種，濃度為0.1M，pH范圍從4.6到8.5；添加劑則沒有選擇任何試劑成分。

表1：SaltRx-HT96條件成分表

使用SaltRx-HT的96條件試劑盒對以下20種蛋白質進行結晶條件篩選研究，分別為溶菌酶、蛋白酶K、過氧化氫酶、伴刀豆球蛋白、甜味蛋白、核糖核酸酶I-A、核糖核酸酶III-A、核糖核酸酶XII-A、纖維素酶、枯草桿菌蛋白酶A、α-乳白蛋白、葡萄糖磷酸酶、木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶原、α-糜蛋白酶、肌紅蛋白、α-淀粉酶、細胞色素C、血紅蛋白、胃蛋白酶，統計得出其長出晶體的成功率僅為25%（5/20），結果發現SaltRx-HT對于大部分蛋白質（15/20）的篩選結晶條件無效，因此本發明嘗試從結晶篩選試劑這一角度出發，試圖尋找更適合蛋白質結晶的試劑條件，而組合成為一種新的高效的蛋白質結晶條件篩選試劑盒則顯得十分必要。

SaltRx-HT的96條件試劑盒對溶菌酶、蛋白酶K、伴刀豆球蛋白、過氧化氫酶等幾種蛋白進行了結晶條件篩選研究，統計出其篩選的成功率分別為：41.67%、40.63%、36.46%、34.38%。

但是SaltRx-HT的局限在于所用沉淀劑的組合是自由選取的，其濃度配比范圍相對較低，這對蛋白質結晶篩選的成功率還存在提高的空間；所選緩沖區間以及添加劑的試劑種類過少，不利于提高蛋白質的溶解性和穩定性。

發明內容

為了克服現有技術在蛋白質結晶條件篩選中成功率低的不足，本發明提供一種以鹽類作為沉淀劑，而且使用更加高效、全面的蛋白質結晶篩選鹽類試劑盒，可以有效提高蛋白質結晶條件篩選的成功率。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：包括緩沖液、沉淀劑和添加劑，具體組成如下表所示：

本發明的有益效果是：①本發明設計的96條件鹽類篩選試劑盒包含種類繁多的各種篩選試劑，20多種鹽類的沉淀劑組合不僅在結晶成功率上高于目前市場上最為流行的SaltRx-HT鹽類篩選試劑盒，而且獲得的蛋白質單晶尺寸較大，形貌較好，晶體質量高；②本發明結合其特色設計合適的酸堿環境并選擇了7種緩沖能力較強的緩沖液，使得pH范圍盡可能地廣泛，從4.0至9.0，覆蓋了大部分蛋白質可結晶的pH區間，從而提高了結晶的成功率，增加了結晶的可能性；③本發明試劑盒所選沉淀劑的濃度相對較高，濃度范圍從0.5M至7M，所選沉淀劑的種類也多達28種，可以有助于提高結晶篩選效率；⑤本發明可以為提高蛋白質結晶篩選的成功率提供一種有效途徑。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進一步說明，本發明包括但不僅限于下述實施例。

本發明設計了一種用于蛋白質結晶條件篩選的96條件鹽類試劑盒，該試劑盒是選擇結晶效率較高的鹽作為結晶試劑盒中的沉淀劑，同時加入一些添加劑分子以提高蛋白質的溶解性和穩定性來獲得篩選效率高的鹽類結晶試劑盒。