[發明專利]一種用于高效構建無抗性標記重組分枝桿菌的抗性表達盒

有效

• 申請號: 201310386264.0
• 申請日: 2013-08-29
• 公開（公告）號: CN103451181A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 張天宇;楊峰;鄒文英
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

1.一種精簡改造后的潮霉素抗性基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.一種用于高效構建無抗性標記重組分枝桿菌的抗性表達盒，含有精簡后的潮霉素抗性基因，以及位于潮霉素抗性基因兩端的dif1和dif2序列，其特征在于，所述精簡后的潮霉素抗性基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，dif1和dif2序列分別如SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示。

3.根據權利要求2所述的抗性表達盒，其特征在于，所述表達盒兩段還添加了多重酶切位點。

4.根據權利要求3所述的抗性表達盒，其特征在于，所述抗性表達盒的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5或SEQ?ID?NO:6所示。

5.含有權利要求2～4任一項所述抗性表達盒的重組質粒。

6.根據權利要求5所述的重組質粒，其特征在于，所述質粒的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

7.一種用于高效構建無抗性標記重組分枝桿菌的重組質粒，其含有：啟動子、噬菌體整合位點、整合酶基因、權利要求2～4任一項所述的抗性表達盒、復制起始位點。

8.根據權利要求7所述的重組質粒，其特征在于，按順時針方向，依次含有噬菌體整合位點、整合酶基因、權利要求2～5任一項所述的抗性表達盒。

9.根據權利要求7或8所述的重組質粒，其特征在于，所述啟動子為LacZ啟動子或BLA啟動子，所述復制起始位點為大腸桿菌復制起點。

10.根據權利要求7或8所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒的的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。