[發(fā)明專利]一種撲草凈分子印跡固相萃取柱及使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310384267.0
• 申請日: 2013-08-30
• 公開（公告）號: CN103433009A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 方柔;陳冠華;伊聆曉;張麗;邵鈺秀
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: B01J20/281
• 分類號: B01J20/281;B01J20/30;G01N1/34;G01N1/40
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術領域

本發(fā)明涉及固相萃取技術領域，特指一種撲草凈分子印跡固相萃取柱和使用方法，并和毛細管電泳方法結合用于選擇性分離、富集和檢測谷物樣品中西瑪津、莠去津、西草凈、撲滅津、莠滅凈、特丁津、撲草凈和特丁凈的殘留。

背景技術

三嗪類除草劑是在世界范圍內被廣泛使用的一類農(nóng)藥，為環(huán)境荷爾蒙的可疑物質，能夠引發(fā)癌癥和干擾內分泌，然而三嗪類除草劑在食品中的殘留濃度很低，往往需要在檢測前進行適當富集，另外，在提取后進行的多殘留色譜檢測中，被同時提取出來的大量共存基質特別容易污染色譜柱，還需要通過凈化使基質得以去除，即使采用了沒有柱污染問題的毛細管電泳方法，有些種類的樣品由于基質復雜，其基質信號與分析物信號有可能發(fā)生重疊，影響到定量結果的準確性，同樣需要對樣品進行凈化，因此，對于食品中該類除草劑殘留的檢測來說，富集和凈化是十分必要的。

固相萃取因使用的試劑量較少，對操作人員的傷害較小，操作耗時較短而被日益廣泛地應用于農(nóng)藥殘留檢測的樣品前處理中，成為富集和凈化的最常用方法之一，但是眾所周知，固相萃取柱中使用的填料通常都是一些非特異選擇性的吸附材料，在實際應用時，往往容易同時提取出其它的干擾物質，影響檢測結果，再者目前的商用固相萃取柱多為一次性使用，這無形之中也增加了檢測成本；分子印跡聚合物是為模板分子量身定做的高分子聚合物，對模板分子和其結構類似物具有高識別性，而且可重復使用多次，這些都是普通固相萃取填料所不能比擬的，目前報道的分子印跡固相萃取填料多采用本體聚合法，經(jīng)研磨得到的材料顆粒不均勻，許多結合位點被包裹于顆粒內部，不能充分發(fā)揮印跡材料的功能。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的制備和使用方法，與本發(fā)明不可分割的部分——毛細管電泳多殘留檢測方法相結合，可實現(xiàn)對谷物中西瑪津、莠去津、西草凈、撲滅津、莠滅凈、特丁津、撲草凈和特丁凈殘留的同時檢測。

具體步驟如下：

一種撲草凈分子印跡固相萃取柱，其特征在于：所述的固相萃取柱采用如下制備方法進行制備：

（1）將撲草凈、甲基丙烯酸按照1:4的摩爾比混合溶解于二氯甲烷中，于室溫下放置過夜，其中二氯甲烷體積（mL）與甲基丙烯酸量（mmol）的比值為8~10：1，按照撲草凈與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:20的比例以及與偶氮二異丁腈摩爾比為1:0.24的比例將二者加入到上述溶液中超聲振蕩至混合均勻后，向裝有溶液的圓底燒瓶通入氮氣以去除氧氣，保證聚合反應能夠順利進行，然后將燒瓶置于50^°C-60^°C恒溫電熱套中在旋轉條件下反應，制得聚合物微球，將聚合物微球置于索式提取器中，用乙酸-甲醇混合溶劑洗去模板分子，然后用甲醇清洗去除聚合物微球中殘留的乙酸，并用丙酮反復沉降除去過細微粒，最后放入真空干燥器中干燥至恒重，得到撲草凈分子印跡聚合物微球。

（2）稱取撲草凈分子印跡聚合物微球，填充至底部裝有篩板的空固相萃取柱中，再在填料的上方放置篩板并壓實，制得撲草凈分子印跡固相萃取柱。

所述的在旋轉條件下反應指在100-350rpm轉速下反應15-24h，在15h聚合反應完畢，可以繼續(xù)增加至24h，但對實驗結果無影響，超過24h這個時間聚合物的吸附能力會有所下降。

所述的乙酸-甲醇混合溶劑指乙酸和甲醇按照體積比1：9混合得到的溶劑。

所述的撲草凈分子印跡聚合物微球填充至底部裝有篩板的空固相萃取柱中的填充的高度不低于15mm。

2、撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，按照下述步驟進行：

（1）將上述分子印跡固相萃取柱置于真空固相萃取裝置上，依次用二氯甲烷、甲醇和超純水在負壓狀態(tài)下淋洗活化，并抽干淋洗溶劑，其中三種溶劑的體積比為3:2:2。

（2）使制備的以二氯甲烷為溶劑的樣品溶液在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱，抽干溶劑。

（3）以二氯甲烷-乙腈混合溶液為淋洗劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱進行淋洗，抽干淋洗劑，并保持連續(xù)抽干狀態(tài)。

（4）以甲醇-水混合溶液作為洗脫溶劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱對分析物進行洗脫，抽干洗脫劑。

（5）將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用緩沖溶液定容后供毛細管電泳檢測。

3毛細管電泳檢測按照下述電泳條件進行：