[發明專利]一種替考拉寧的純化方法

有效

• 申請號: 201310383825.1
• 申請日: 2013-08-29
• 公開（公告）號: CN103408640A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 謝鵬;趙培靜;夏楓耿;張瑋亮;秦鵬;明飛平;梁淑娃;劉燕珠;黃魁英
• 申請（專利權）人: 廣州市微生物研究所
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/16;C07K1/14
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 謝敏楠

技術領域

本發明屬于化學領域，涉及一種純化替考拉寧的方法。

背景技術

替考拉寧是繼萬古霉素之后開發的另一種抗耐藥菌的糖肽類抗生素，其主要對革蘭陽性需氧菌和厭氧菌具有較強的抗菌活性，特別是對MRSA所致感染有很好的療效，是目前臨床上為數不多的對多重耐藥性金葡菌和腸球菌仍有抗菌活性的藥物之一。與當前國際上公認的抗耐藥菌抗生素萬古霉素相比，替考拉寧具有與之相似的抗菌活性，相同的作用機制，相近或更優的臨床療效，而且毒性反應更低，特別是腎毒性更低，也不會發生使用萬古霉素后引發的“紅人綜合征”。

替考拉寧是游動放線菌發酵生產的由多種成分組成的混合物，結構復雜，對熱、酸、堿穩定性差，生產過程中容易引起失活和分解，且發酵液中替考拉寧的含量較低，一般都需要較復雜的分離純化過程。目前公布的兩項替考拉寧的純化方法專利（專利號200710107185.6和20071016615.5）中提出了向替考拉寧濃縮液中添加丙酮進行結晶或鹽析結晶的方法。但是該兩項專利中提及的工藝繁瑣，生產設備投入大，超濾濃縮會增加濃液雜質濃度，并且所使用的有機溶劑易污染環境，鹽析結晶過程中還會容易包夾金屬鹽離子，引入雜質，降低樣品純度與效價。

真空冷凍干燥是先將濕料凍結到共晶點溫度以下，使水分變成固態的冰，然后在較高的真空度下，使冰直接升華為水蒸氣，再用真空系統中的水汽凝結器將水蒸氣冷凝，從而獲得干燥制品的技術。干燥過程是水的物態變化和移動的過程。這種變化和移動發生在低溫低壓下。因此，真空冷凍干燥的基本原理就是低溫低壓下傳質傳熱的機理。?????近年來，在西藥制備方面，已有研究顯示，利用該法制備某些藥品，藥品結構穩定，生物活性基本不變；藥物中的易揮發性成分和受熱易變性成分損失很少。例如，呋脲芐西林鈉的合成中，使用冷凍干燥技術進行濃縮結晶，純度達到86%，收率達到92.8%。在門冬酰胺酶的制備工藝中，通過使用冷凍干燥技術，得到了純度、比酶活等指標符合《中華人民共和國藥典2010年版》相關規定的結晶品。

但是，上述應用冷凍干燥技術進行結晶的技術，目前通常只限制用于相對較純，例如純度達到70%或以上的物質中，用以進一步提高純度。對于存在較多干擾物質的物質，例如發酵液，目前尚沒有任何相關的研究或報道。

發明內容

本發明的目的之一在于克服以上現有的技術的缺陷，提供一種工藝簡便，經濟，安全，低污染的替考拉寧制備方法。

本發明的另一目的在于提供得率進一步得到提升的高純度替考拉寧的純化方法。

為解決以上問題，本發明提供了一種替考拉寧的純化方法，所述方法是將含替考拉寧溶液采用真空冷凍干燥法進行濃縮結晶。

該方法包括以下步驟：

S1.?將含替考拉寧溶液冷凍至-40℃～-45℃進行預凍；

S2.?抽真空，再加熱至-12～-10℃進行升華干燥；

S3.?再加熱至20℃～25℃進行解吸干燥，最終獲得高純度的替考拉寧。

優選地，S1所述冷凍是以38～42℃/h的速率降溫，達到-40℃～-45℃后保溫3～4h；作為更優選的方案，S1所述冷凍是以40℃/h的速率降溫。

優選地，S2所述的抽真空是使壓力到達8～15Pa。

優選地，S2所述的加熱過程升溫速率為6～8℃/h；升華干燥過程直至升華界面達到瓶底并消失，再保溫2～4h之后結束。

????優選地，S3所述的加熱是以8～10℃/h的速率進行升溫，升溫至20℃～25℃后再保溫3～5h。

所述的含替考拉寧溶液可以是多種生產方法所獲得的溶液，例如，該含替考拉寧溶液是游動放線菌發酵液經柱層析洗脫所得的洗脫液，進一步經活性碳處理后所得的溶液。

作為一種實施方案，替考拉寧的純化方法如下：對含替考拉寧溶液濃縮結晶過程中采用真空冷凍干燥法。其中，真空冷凍干燥法在以38～42℃/h的冷凍速度進行預凍，樣品達到-40℃～-45℃后保溫3～4h，之后抽真空使壓力到達8～15Pa時，以6～8℃/h的速率緩慢加熱至-12～-10℃進行升華干燥，樣品溫度曲線重合，干燥層和凍結層的交界面到達盤底并消失再保溫2～4h。之后以8～10℃/h進行加熱解吸干燥，樣品溫度到達20℃～25℃后再保溫3～5h。

冷凍干燥的結晶原理為：