[發明專利]犬細小病毒病毒樣顆粒的制備及用途

有效

• 申請號: 201310381323.5
• 申請日: 2013-08-28
• 公開（公告）號: CN103409377A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 郭慧琛;孫世琪;徐進;魏衍全;孫德惠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;C12N15/70;A61K39/23;A61P31/20;G01N33/68;G01N33/569;C12R1/93
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.犬細小病毒病毒樣顆粒，其特征在于由VP2蛋白組成，其基因序列為SEQ?ID?№1。

2.權利要求1所述的犬細小病毒病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于以犬細小病毒DNA為模板，用SEQ?ID?№2和SEQ?ID?№3為引物擴增得到擴增產物，將擴增產物插入載體pSMK中，得重組質粒pSMK-VP2，將pSMK-VP2轉化到大腸桿菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL株，在37℃，含卡那霉素（Kanamycin?）(50μg/mL)?和氯霉素（chloramphenicol）（34μg/ml）的LB培養基中培養重組大腸桿菌，以IPTG誘導表達重組蛋白，再將重組蛋白純化后進行體外組裝，得到犬細小病毒病毒樣顆粒。

3.根據權利要求2所述的犬細小病毒病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于VP2重組蛋白純化方式為親和層析純化。

4.根據權利要求3所述的犬細小病毒病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于將表達菌沉淀超聲裂解后的上清轉移至經buffer?A（500mM?NaCl、20mM?Tris-HCl、20mM?Imidazole、1mM?DTT，pH=8.0）平衡的鎳親和層析樹脂層析柱中，在室溫條件下結合1h，之后用buffer?A洗滌層析柱，目的蛋白用buffer?B（500mM?NaCl、20mM?Tris-HCl、300mM?Imidazole、1mM?DTT，pH=8.0）洗脫，每次1ml，反復洗脫5-6次。

5.根據權利要求2或3或4所述的犬細小病毒病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于重組蛋白純化后進行體外組裝方法為：將重組融合VP2蛋白按質量比100:1加入sumo酶，再置于透析袋內，透析袋外部的緩沖液為150mM?NaCl，50mM?Tris-HCl，pH?7.0，組裝時整個緩沖體系置于攪拌儀上，使緩沖液輕微攪動，得到犬細小病毒病毒樣顆粒。

6.權利要求1所述的犬細小病毒病毒樣顆粒在制備用于預防犬細小病毒引起疾病的疫苗中的應用。

7.權利要求1所述的犬細小病毒病毒樣顆粒在制備用于檢測犬細小病毒的檢測試劑中的應用。