[發明專利]海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、培養基及方法

有效

• 申請號: 201310378524.X
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN103449914A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 陸榮生;韓美麗;廖燕芬;馬躍峰;覃建林;楊玉霞;馬永林
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院植物保護研究所;賓陽縣陽光食用菌種場
• 主分類號: C05G3/00
• 分類號: C05G3/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 楊立華

技術領域

本發明屬于食用菌貯藏領域，尤其涉及一種海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、培養基及方法。

背景技術

糙皮側耳（Pleurotus?ostreatus）又稱平菇，是世界上第三大人工栽培的食用菌。糙皮側耳肉質肥嫩，營養豐富，每100克干品中含蛋白質30．5克、脂肪3．7克、纖維5．3克，含氨基酸達18種之多，其中有8種是人體所必需的，并含有維生素B、C、D及鐵、磷、鉀、鉬、鋅、鈣等多種礦物質。平菇不僅營養豐富，且有較高的藥用價值，經常食用有改善人體新陳代謝、增強人體體質和調節神經系統的功能。目前糙皮側耳菌種的貯藏方式主要以固體為主，其不足之處在于：需4-10℃低溫冷藏，1-2個月內需續代一次，固體菌種通常是玻璃試管，運輸不方便。

海藻糖（Trehalose）是一種安全、可靠的天然糖類。近年科學研究發現，海藻糖對生物體具有神奇的保護作用，它在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環境條件下在細胞表面能形成獨特的保護膜，有效地保護蛋白質分子不變性失活，從而維持生命體的生命過程和生物特征。海藻糖獨特的功能特性使其除了可以作為天然食用甜味糖外，還作為優良活性保護劑在蛋白質藥物、酶、疫苗和其他生物制品上有較多的應用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、培養基及方法，以實現常溫貯藏糙皮側耳菌種，減少菌種保存過程中的繼代次數，方便運輸和菇農使用及學校教學科研。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用。

延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基A用于菌絲培養，每1000ml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。

培養基A按以下步驟配制：按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。

延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基B用于菌絲貯藏，每1000ml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。

培養基B按以下步驟配制：按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。

延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基C用于菌種使用前的活化，每1000ml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、蔗糖15g、麥芽糖5g，其余為水。

培養基C按以下步驟配制：按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。

延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，包括以下步驟：

（1）將培養基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養液100ml，120℃滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cm×0.5cm×0.5cm大小的固體母種，28℃室溫下震蕩培養，搖床搖速60次/分，培養時間120小時(5天)；

（2）將步驟（1）得到的培養物在4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養液體積的1/3（約33ml），搖床震蕩培養6小時，然后4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物；

（3）將步驟（2）得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉移至無菌的聚丙烯塑料試管內，在低于30℃的室溫下貯藏待用。

上述延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，還包括以下步驟：

（4）菌種使用之前，將步驟（3）得到的1份貯藏菌種加滅過菌的培養液C100ml，常溫下震蕩培養4小時，然后根據需要，接種于原種或栽培種上。

針對現有糙皮側耳低溫貯藏要求高、續代次數多、運輸不便等問題，發明人結合液體培養基中添加海藻糖可延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的研究成果，據此配制了相應的培養基，并建立了延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，實現了其常溫貯藏。與現有的固體菌種低溫貯藏技術相比，本發明具有以下突出優點：

（1）占用空間小