[發明專利]一種乙酰化靈芝多糖及其制備方法

無效

• 申請號: 201310377936.1
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN103408674A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 吳迪;張勁松;劉艷芳;楊焱;唐慶九;馮娜;周帥;唐傳紅;賈薇;汪雯翰
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 劉懿

技術領域

本發明涉及食用菌多糖結構改造技術領域，具體地涉及一種乙酰化靈芝多糖及其制備方法。

背景技術

多糖是由10個以上單糖通過糖苷鍵連接而成的聚合體，是生物體內除蛋白質和核酸外又一類重要的生物大分子，多糖的結構因素包括多糖的主鏈性質、支鏈性質和多糖分子的高級結構，其中多糖主鏈的糖單元組成、糖苷鍵類型均直接決定了多糖的活性，多糖支鏈的類型、聚合度、支鏈在多糖鏈上的分布及其取代度決定了多糖活性的大小，因此為提高或是改變多糖的生物活性，多糖的分子修飾和結構改造具有重要意義。

靈芝是一種營養、保健價值極高的大型擔子菌，素有“仙草”之譽，是中醫藥學寶庫中的珍品。國內外的大量研究結果表明，靈芝具有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤活性、增強免疫功能、抗病毒以及抗突變、降血脂、降血糖等功效，且毒性極低。目前尚未有靈芝多糖乙酰化相關的專利。?

發明內容

本發明首先提供了一種乙酰化靈芝多糖，其是用如下方法制備得到的：

靈芝子實體進行水提、透析和離子交換柱層析，得到靈芝多糖；

對靈芝多糖進行乙酰化修飾。

具體的說，本發明的一種乙酰化靈芝多糖，是用如下方法制備得到的：

靈芝子實體用80-120℃水進行提取；然后將水提液通過透析袋進行透析；然后進行陰離子交換柱層析，濃縮干燥得到靈芝多糖；

將靈芝多糖用乙酸酐-吡啶法進行乙酰化修飾。

更具體的說，本發明的一種靈芝多糖乙酰化衍生物，是用如下方法制備得到的：

將靈芝子實體粉碎、80-120℃水熱水提取，得到靈芝粗提物水提液；

靈芝粗提物水提液通過透析袋透析，冷凍干燥得到靈芝粗提物干品；

將靈芝粗提物干品配制成10-40mg/mL的水溶液，10000rpm，離心30min，取上清10-50mL用陰離子交換柱層析純化；

陰離子交換柱層析純化具體的說是采用?KTA層析系統，先以蒸餾水洗脫，再以0-2mol/L的NaCl梯度洗脫，流速4mL/min，分部收集，以苯酚-硫酸法逐管檢測每管的多糖含量，根據多糖的洗脫曲線合并各峰，然后濃縮、透析、干燥得離子柱分離的組分；

稱取離子柱層析所得組分，按1:200-400（w/v）加入二甲基亞砜，超聲波振蕩后室溫靜置30分鐘，按1:1-10（w/v）加入吡啶，按照1:10-20（w/v）加入N,N二甲基氨基吡啶的乙腈，再按1:1-15（w/v）加入乙酸酐，置于30℃反應0-8h，取出后加水終止反應，并轉移至透析袋中，分別用自來水透析1天，蒸餾水透析2天，冷凍干燥得到靈芝多糖的乙酰化衍生物。

其中所述的透析袋截留量為3000-3500Da；

其中所述的陰離子柱層析，為DEAE-Sepharose?Fast?Flow陰離子柱層析。

本發明還提供了制備上述靈芝多糖乙酰化衍生物的方法，該方法為：

靈芝子實體進行水提、透析和離子交換柱層析，得到靈芝多糖；

對靈芝多糖進行乙酰化修飾。

多糖乙酰化修飾是一種重要的修飾方法，多糖的乙酰化可以改變多糖分子的定向性和橫向次序，從而改變多糖的物理性質，乙酰基的引入使分子的伸展發生變化。本發明制得的乙酰化靈芝多糖未改變多糖的單糖組成，但單糖含量發生變化，同時乙酰化修飾后的靈芝多糖組織狀態和溶解性均發生了變化，這為提高或改變多糖的生物活性，擴大靈芝的應用范圍，提高靈芝的利用率都具有非常重要的現實意義和學術價值。

本發明采用乙酸酐-吡啶法制備的靈芝乙酰化衍生物具有顯著的刺激巨噬細胞產生NO的作用，且刺激巨噬細胞產生NO活性的能力與乙酰化的取代度有關，取代度為0.98時活性最高產生NO量為38.22μmol（濃度25μg/mL）。

具體實施方式

本發明使用的靈芝子實體由上海市農科院食用菌所提供；

本發明使用?KTA層析系統、填料DEAE-Sepharose?Fast?Flow均購自美國通用電氣公司；

本發明使用其他試劑均購自國藥集團化學試劑有限公司（上海）

實施例1

將靈芝子實體粉碎后，按照1kg子實體加入15L水的比例加水浸泡30分鐘后，加熱煮沸，于100℃提取2小時，過濾，濾渣按料液比1:15加水再提取一次，合并濾液，濾液濃縮后透析，冷凍干燥，得靈芝粗提取干品。