[發明專利]一種中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1及其建立方法

在審

• 申請號: 201310374517.2
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN103966169A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 張雁;賀姮;張海霞;汪華
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N5/095
• 分類號: C12N5/095;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

1.中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1的建立方法，其特征在于，包括如下具體步驟：

A）采用組織塊貼壁法進行舌部鱗狀上皮細胞癌細胞的原代培養；

B）當細胞密度達到約80%的時候進行傳代培養；

C）將傳代穩定的細胞經RT-PCR檢測表明細胞表達人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞標志性分子CK8、18、19；

D）經免疫印跡實驗檢測貼壁細胞表達人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞標志性分子CK8、18蛋白，由此從分子水平上證明成功建立中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1。

2.如權利要求1所述的中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1的建立方法，其特征在于，步驟A的具體方法為：

1）I型膠原包被培養皿室溫靜止1小時以上，1×PBS 洗皿一次，待用；

2）準備培養液，放于37℃恒溫水浴鍋中溫育10 分鐘；

3) 在超凈臺中取出舌部鱗狀上皮細胞癌組織，在酒精中消毒不超過10 秒，在1×PBS 中浸泡一下，除去不需要的部位，放到培養液中；

4）將組織剪成小碎塊，均勻分種入培養皿中，加入適量培養液，使組織一半浸于培養液中；

5）置于37 ℃，5%CO₂ 的培養箱中培養；

6）第二天補充適量培養液至稍稍浸沒組織塊；

7）視細胞生長情況進行適當換液。

3.如權利要求1所述的中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1的建立方法，其特征在于，步驟B的具體方法為：

1）棄培養液，用1×PBS 洗一次，加入胰蛋白酶消化；

2）加入血清終止消化；

3）吹打細胞，置于離心管中，加入適量的培養液吹打；

4）離心1000rpm，5分鐘；

5）棄上清，加入適量培養液吹打散；

6）將細胞懸液加入新的培養皿中，得到所述中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1。

4.如權利要求1所述的中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1 在研究治療人舌部鱗狀上皮細胞癌的藥物中的用途。

5.如權利要求1所述的中國人舌部鱗狀上皮細胞癌細胞系CTSC-1 在治療人舌部鱗狀上皮細胞癌的藥物中的用途。