[發明專利]一種提取純化衛矛苷A的方法

無效

• 申請號: 201310374054.X
• 申請日: 2013-08-26
• 公開（公告）號: CN103408627A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 劉東鋒;萬冬梅
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07J19/00
• 分類號: C07J19/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于天然植物提取技術領域，涉及一種提取純化衛矛苷A的方法。

背景技術

衛矛苷A（Euonymoside?A?），是從?西博氏衛矛Euonymus?sieboldianus?Bl.的樹皮中提取分離得到的一種強心苷類化合物，分子式：C₃₅H₅₄O₁₄，分子量：698.8，分子結構式為：

衛矛苷A具有細胞毒活性。對人肺癌(A-549)和人卵巢癌(SK-OV-3)的IC50分別為0.06μg/mL和0.4μg/mL。

國內現有技術中，尚未見制備衛矛苷A生產工藝的相關專利報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種從西博氏衛矛的樹皮中提取純化衛矛苷A的方法。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：

一種提取純化衛矛苷A的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）取西博氏衛矛的干燥樹皮粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；

2）用醇類溶液對酶解原料進行微波提取，提取液回收乙醇；

3）浸膏加熱水溶解，上大孔樹脂柱吸附，水-乙醇洗脫，洗脫液用超濾膜超濾，納濾膜濃縮，濃縮液干燥得濃縮物；

4）將濃縮物進行色譜分離，得高含量衛矛苷A。

所述步驟1）中對西博氏衛矛的樹皮進行粉碎處理，控制粒徑為40-60目。

所述步驟1）中生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的0.1-0.8%。

所述步驟2）中醇類溶液為70-90%乙醇水溶液，固液體積比為1:8-1:13。

所述步驟2）中微波功率為800-1000W，提取2-3次，每次20-40min。

所述步驟3）中大孔樹脂可選AB-8、D101、HPD100和HZ830中一種。

所述步驟3）中洗脫劑為3-5BV水→3-5BV20-40%乙醇→5-7BV75-85%乙醇。

所述步驟3）中超濾膜為截留分子量3000-10000的中空復合膜，納濾膜為截留分子量300-500的中空復合膜，進口壓力控制0.5-0.9Mpa。

所述步驟4）中色譜分離采用高速逆流色譜進行，其兩相溶劑系統為氯仿-甲醇-水，體積比為（11-15）：（5-8）：（4-9），所述高速逆流色譜儀轉速為850-1050rpm，流動相流速為3-5ml/min。

本發明的優勢在于以西博氏衛矛的樹皮為原料，成本低；采用微波提取，提取時間短、提取效率高，采用的溶劑均為易回收、無毒或低毒的有機溶劑；采用大孔樹脂柱層析富集純化，可除去多種雜質，減輕了后面工序的工作量；采用高速逆流色譜分離效果好，產品純度高。

具體實施方式：

實施例1：

取西博氏衛矛的樹皮粉碎至60目，稱取500g加入2倍量pH5的酸水拌濕，加0.5g纖維素酶，常溫酶解2天，酶解原料投入微波萃取罐，加入4kg70%乙醇溶液微波提取40min，功率800W，放出提取液，再加入70%乙醇提取2次，合并三次提取液，用旋轉蒸發儀回收乙醇至少量，加入AB-8型大孔樹脂柱層析（柱徑高比1:12），依次用5BV水→3BV40%乙醇→5BV75%乙醇洗脫，高效液相色譜監測，收集流分，洗脫液加入截留分子量5000的中空復合膜超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量300中空復合納濾膜濃縮，進口壓力控制0.7Mpa，得濃縮液，將濃縮液低溫干燥得濃縮物；取氯仿-甲醇-水（11:5:7）置于分液漏斗中混合均勻，取上相為固定相，下相為流動相，取上述濃縮物溶于流動相中備用，開啟高速逆流色譜儀，設定流動相流速為3.0ml/min，同時開啟主機電機，自流動相流出時開始進樣，轉速控制為950rpm，通過檢測器收集衛矛苷A流分，濃縮并干燥得衛矛苷A，高效液相檢測含量為90.6%。

實施例2：