[發明專利]一種用于白細胞分類計數的方法以及試劑盒

有效

• 申請號: 201310373398.9
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN103398935A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 鐘志宏;丁建文
• 申請（專利權）人: 愛威科技股份有限公司
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用于白細胞分類計數的方法以及試劑盒。

背景技術

白細胞亦稱白血球，血液細胞成分之一，為無色圓形細胞，比紅細胞略大，有細胞核。可分為嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞五種。在機體發生炎癥或疾病時，白細胞數往往發生變化，故為疾病檢查診斷方法之一。比如嗜中性粒細胞增多見于急性感染、尿毒癥、嚴重燒傷急性出血、組織損傷等；其減少見于傷寒及副傷寒、再生障礙性貧血、急性粒細胞缺乏癥、脾功能亢進等。嗜酸性粒細胞增多見于變態反應；減少見于傷寒、副傷寒、使用腎上腺皮質激素后。嗜堿性粒細胞增多見于慢性粒細胞白血病、何杰金氏病、癌轉移、鉛鉍中毒等。淋巴細胞增多見于百日咳、傳染性單核細胞增多癥、慢性淋巴細胞性白血病、麻疹、腮腺炎、結核、傳染性肝炎等；減少多見于傳染急性期、細胞免疫缺陷等。單核細胞增高見于瘧疾等。

采用瑞士試劑對樣品染色并進行人工鏡檢是白細胞五分類計數的“金標準”，但是隨著人們對臨床檢測要求的不斷提高，這種耗時、繁瑣的標準方法越來越不適應如今的臨床檢測。隨著醫學血液學的發展,各種類型的血細胞分析儀配合專用試劑（如溶血劑等）的檢測方法在國內得到了廣泛的應用,這些全自動的儀器先通過專用試劑處理紅細胞（RBC），然后采用流式技術或電阻抗的計數原理，通過獲取白細胞不同細胞器發射出的熒光信息和散射光信息將白細胞分成不同種類。

但是人們研究發現，血細胞分析儀只能將白細胞分為大細胞、中間細胞和小細胞三種，其中大細胞是以嗜中性粒細胞為主，小細胞則以淋巴細胞為主，中間細胞為（嗜酸+嗜堿+單核），而無法知道嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞及單核細胞分類結果。同時，當重度貧血等疾病，血中出現有核紅細胞增多時，會被儀器誤認為是白細胞，而分類于白細胞中。對于白血病病人，大量的出現幼稚細胞存在于外周血液中時，會被儀器誤認為是成熟的白細胞而被分類于成熟的白細胞中,對于異常細胞不具有識別能力，容易造成此類病人的漏診。因此，在使用血細胞分析儀進行白細胞五分類計數檢測時，仍需要進行人工鏡檢加以矯正結果，檢測過程仍是比較繁瑣。

現有技術中公開了多種專用試劑和染色液，如CN200980116627，一種基于熒光信息和散射光信息，對測定樣品中的白細胞進行5分類的溶血劑。其在白細胞分析上主要采用兩個通道進行細胞計數和分類，兩個通道均采用激光和鞘流進樣的方式測定。DIFF通道：STROMATOLYSER-4DL試劑中的表面活性劑可以溶解掉標本中的紅細胞和血小板，并在白細胞膜上打出小孔；然后第二種試劑STROMATOLYSER-4DS中的聚次甲基染料通過這個小孔進入白細胞中，與細胞核的核酸和細胞器結合，在經過波長633nm的激光照射，產生的熒光強度與細胞的核酸含量成正比。STROMATOLYSER-4DL試劑還具有與嗜酸性顆粒特異性結合的能力，可根據側向散射光信號強度，將嗜酸性粒細胞從中性粒細胞中分離出來。這樣可以將中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞清楚的分離開。在DIFF散射圖當中可以得到白細胞的四個分群（LMNE）。

CN2011100744709涉及一種用于白細胞五分類計數的溶血劑及用途。所述溶血劑由溶血劑A與溶血劑B組成。溶血劑A含有聚氧乙烯型非離子表明活性劑、有機酸、季按鹽陽離子表面活性劑助溶劑、穩定劑和滲透壓調節劑。

CN2010102787102涉及一種對白細胞進行分類的試劑，其公開了一種對白細胞進行分類的試劑，能將白細胞分為淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞和嗜堿性粒細胞相對應的五個基團。所述試劑包括緩沖劑和溶血劑，其特征是溶血劑由至少兩種甜菜堿型兼性離子表面活性劑組成。

但是上述專用試劑破壞RBC后會留下紅細胞碎片，這些碎片不影響基于流式技術或電阻抗的計數原理的血細胞分析儀的檢測，但卻會干擾基于機器視覺原理的細胞形態學分析技術的白細胞分類計數，而且這些試劑的染色方法也不適應普通光學顯微鏡下人工識別。為此，急需要提供一種適用于基于機器視覺原理的細胞形態學分析技術的分析儀的白細胞分類計數專用試劑，以便利于白細胞的臨床檢測。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種用于白細胞分類計數的方法以及試劑盒，使其能夠適用于基于機器視覺原理、以細胞形態學分析技術對樣品中有形成分進行自動識別與分類計數的樣本有形成分鏡檢分析儀進行白細胞五分類的檢測，保證檢測結果的準確性。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種用于白細胞分類計數的試劑盒，包括試劑A和試劑B；

其中，試劑A組成成分和濃度為：