[發(fā)明專利]一種用于生豬輔助防疫的復(fù)合微生態(tài)制劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310373237.X
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN103444784A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳琳;莫艷華;秦火保;周世須
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大用生物應(yīng)用科技有限公司
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P1/00
• 代理公司: 福州市鼓樓區(qū)京華專利事務(wù)所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

1.一種用于生豬輔助防疫的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于：其制備方法的具體步驟如下：

（1）原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的嗜酸乳桿菌、醋酸桿菌、沼澤紅假單胞菌、釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得嗜酸乳桿菌斜面菌種、醋酸桿菌斜面菌種、沼澤紅假單胞菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；

（2）原菌種液體培養(yǎng)：將嗜酸乳桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基Ⅰ中，之后置于37℃下厭氧培養(yǎng)1-2天得嗜酸乳桿菌原菌液；將醋酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基Ⅱ中，接著于30℃下好氧培養(yǎng)1-2天得醋酸桿菌原菌液；將沼澤紅假單胞菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基Ⅲ中，接著于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)5-7天得沼澤紅假單胞菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培養(yǎng)3天得釀酒酵母原菌液；

（3）一級種子培養(yǎng)：將嗜酸乳桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、沼澤紅假單胞菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按1：1：1：1的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種醋酸桿菌原菌液與釀酒酵母原菌液，并于30℃下好氧培養(yǎng)3天，再接種嗜酸乳桿菌原菌液與沼澤紅假單胞菌原菌液，于30℃下厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級種子；

（4）二級種子培養(yǎng)：將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅱ中，并于30℃下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級種子；

（5）成品培養(yǎng)：將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅲ中，并于30℃下先好氧3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，獲得復(fù)合微生態(tài)制劑的成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于：所述步驟（1）中嗜酸乳桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將嗜酸乳桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基Ⅰ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基Ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養(yǎng)基Ⅰ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于：所述步驟（1）中醋酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基Ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基Ⅱ置于121℃下滅菌20min，接著冷卻至60℃以下加入無水乙醇，且每1000ml斜面培養(yǎng)基Ⅱ需加入100ml無水乙醇，之后用接種環(huán)將醋酸桿菌接種于斜面培養(yǎng)基Ⅱ上，然后于30℃下好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基Ⅱ的組分：酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH5.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于：所述步驟（1）中沼澤紅假單胞菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將沼澤紅假單胞菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基Ⅲ上，之后于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)5-7天；所述斜面培養(yǎng)基Ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養(yǎng)基Ⅲ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于：所述步驟（1）中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基Ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養(yǎng)基Ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。