[發明專利]基于聚乙二醇及葉酸接枝的聚乙烯亞胺改性的PLGA載藥空心微囊的制備方法

有效

• 申請號: 201310371108.7
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103432100A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 史向陽;劉偉娜;溫詩輝
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: A61K9/52
• 分類號: A61K9/52;A61K47/34;A61K47/32;A61K47/22;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于載藥納米材料領域，特別涉及一種基于聚乙二醇及葉酸接枝的聚乙烯亞胺改性的PLGA載藥空心微囊的制備方法。

背景技術

PLGA具有良好的生物相容性、生物降解性、成膜成囊等特性，使其廣泛應用于生物醫學領域。在我們前期工作中，我們采用雙乳化法制備了包裹水溶性抗癌藥物DOX的PLGA空心微囊，可用于超聲成像、磁共振成像及藥物緩釋（申請號：201310207836.4），但該法制備的微球系統缺乏對癌組織的特異靶向性，一定程度上限制了其生物醫學應用。PLGA為鏈狀聚合物，以往使其具備腫瘤細胞靶向性的改性方式是對其末端基團進行接枝，但改性效率較低。最近，Ke等人(H.Ke,et?a1.Angew.Chem.2011,123,3073–3077.)以PLA制備微囊，以靜電吸附方法在PLA微囊外層包裹PAH以達到改性及改變電荷的目的。另外，Liang等人（B.Liang?et?al.Biomaterial.2009,30,4014-4020)以FA和PEG接枝改性PEI使其具備良好的腫瘤細胞靶向性用于膠質瘤的抑制。結合上述方法，在本專利中，我們設計了一種高效的改性方法，先將腫瘤靶向分子葉酸（FA）接枝在聚乙二醇（PEG）上，進而修飾在聚乙烯亞胺（PEI）上，再用靜電吸附法將合成的PEI-PEG-FA包裹在PLGA載藥空心微囊外部。我們評價了PLGA-DOX-PEI-PEG-FA空心微囊良好的腫瘤細胞（KB）的靶向差異性，及藥物緩釋性能。制備的PLGA-DOX-PEI-PEG-FA空心微囊有望成為一種新型的靶向載藥制劑。

檢索國內外有關PLGA微球的藥物制劑方面的文獻和專利結果表明：目前，還沒有發現基于PEI-PEG-FA改性的PLGA空心微囊包裹抗癌藥物的制備與應用方面的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種基于聚乙二醇及葉酸接枝的聚乙烯亞胺改性的PLGA載藥空心微囊的制備方法，該發明的制備過程簡單，實驗條件為常溫常壓，易于操作，所采用的制備程序可用于PLGA-DOX-PEI-PEG-FA空心微囊的制備，用于癌細胞的靶向化學治療，具有很好的實用價值；該發明制備得到的功能化PLGA-DOX-PEI-PEG-FA空心微囊具有良好的DOX藥物負載和緩釋效果以及良好的靶向抗腫瘤活性，為新型多功能靶向藥劑的開發打下了良好的基礎。

本發明的一種基于聚乙二醇及葉酸接枝的聚乙烯亞胺改性的PLGA載藥空心微囊的制備方法，包括：

（1）將葉酸FA溶于溶劑中，加入N-羥基琥珀酰亞胺NHS及碳二亞胺EDC活化羧基，再加入氨基聚乙二醇羧酸NH₂-PEG-COOH，然后在25-28℃條件下，攪拌反應2-3d，透析，凍干，再復溶于溶劑中，加入N-羥基琥珀酰亞胺NHS和碳二亞胺EDC活化羧基，再加入聚乙烯亞胺PEI（Sigma公司），在25-28℃條件下，攪拌反應2-3d，透析，凍干，得到PEI-PEG-FA聚合物；其中投料摩爾比PEI：PEG：FA=1：22：15；

（2）將聚乳酸羥基乙酸共聚物PLGA（山東濟南岱罡公司）溶于有機溶劑中得到油相；將鹽酸阿霉素DOX·HCl（北京華奉聯博科技有限公司）溶于超純水中，得到水相；然后將油相和水相混合，在冰水浴中超聲處理20-30s，得到油包水W/O乳液；其中PLGA與DOX·HCl的質量比為100：1；油相和水相的體積比為5-10:1；

（3）將上述W/O乳液加入聚乙烯醇PVA（sigma公司）水溶液中，冰水浴條件下進行均質化，得到水包油包水W/O/W乳液；其中W/O/W乳液三相（從外到內）體積比為25-100：5-10：1；

（4）將上述W/O/W乳液加入異丙醇水溶液中，攪拌1-4h，使有機溶劑（PLGA溶液的溶劑）揮發，并使形成的乳液液滴固化成微球，離心洗滌，得到PLGA-DOX載藥空心微囊；其中W/O/W乳液和異丙醇水溶液的體積比為1:50-100；

（5）將上述PLGA-DOX載藥空心微囊分散于水中，加入PEI-PEG-FA聚合物水溶液，攪拌15-30min，使聚合物充分靜電吸附在微囊表面，離心洗滌，再分散在水中，冷凍干燥，得到基于聚乙二醇及葉酸接枝的聚乙烯亞胺改性的PLGA載藥空心微囊（PLGA-DOX-PEI-PEG-FA空心微囊）；其中PLGA-DOX載藥空心微囊與PEI-PEG-FA質量比為1-4：1；PLGA-DOX載藥空心微囊分散于水中的水的體積、PEI-PEG-FA聚合物水溶液及再次分散的水的體積比為1:50：30。