[發明專利]一種試劑盒有效
| 申請號： | 201310370789.5 | 申請日： | 2013-08-22 |
| 公開（公告）號： | CN103439492A | 公開（公告）日： | 2013-12-11 |
| 發明（設計）人： | 李相國 | 申請（專利權）人： | 順昊細胞生物技術（天津）有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/541 | 分類號： | G01N33/541 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 300300 天津市濱海新區天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 試劑盒 | ||
1.一種試劑盒，其特征在于包括以下組份：一抗地高辛抗體、二抗鼠抗羊IgG、3H標記羊角拗苷甲、聚乙二醇6000、pH=7.4的磷酸緩沖液（PBS緩沖液）、3H閃爍液、pH=7.4的三羥甲基氨基甲烷緩沖液（Tris緩沖液），含有或者不含有羊角拗苷甲。?
2.根據權利要求1所述的一種試劑盒，其中一抗地高辛抗體12微克/毫升、二抗鼠抗羊IgG5×10-7摩爾/升、3H標記羊角拗苷甲為10Ci/mmol、濃度為20%聚乙二醇6000水溶液、pH=7.4的磷酸緩沖液、3H閃爍液；含有或者不含有羊角拗苷甲。?
3.根據權利要求1-2任一項所述的一種試劑盒，該試劑盒用于檢測人體血清、胎盤組織分泌液、以及冷凍胎盤組織中的內源性洋地黃樣因子的含量。?
4.根據權利1-2任一項所述的一種試劑盒，該試劑盒用于檢測檢孕期先兆子癇或子癇。?
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其中試劑盒用于檢測孕期先兆子癇和子癇的方法為：?
（1）采集胎盤，切成2cm×2cm×2cm大小的組織塊，液氮冷凍，保存于-80℃；?
（2）將冷凍胎盤組織塊切成片，置于勻漿器中，放入液氮罐中冷凍1分鐘；以1500rpm的速度將組織薄片勻漿5分鐘；?
（3）收集勻漿組織，加入等量的甲醇，混勻，以2000rpm的速度離心5分鐘，去除蛋白；收集離心上清液，真空濃縮，4℃保存；?
（4）取出試劑盒中地高辛抗體、二抗鼠抗羊IgG、3H標記羊角拗苷甲、pH=7.4的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，分別等量加入，充分混合，室溫孵育；?
（5）再加入等量的PEG6000溶液，離心，得到沉淀物；?
（6）沉淀物用500μL?pH7.4的PBS重懸，加入3H閃爍液200μL；?
（7）測量樣品放射量，根據標準曲線計算出樣品中所含內源性洋地黃樣因子濃度；?
或者：取孕婦血樣，獲得血清，取出試劑盒中地高辛抗體、二抗鼠抗羊IgG、3H標記羊角拗苷甲、pH=7.4的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，分別等量加入，充分混合，室溫孵育；再加入等量的PEG6000溶液，離心，得到沉淀物；沉淀物用500微升pH7.4的PBS重懸，加入3H閃爍液200μL；測量樣品放射量，根據標準曲線計算出樣品中所含內源性洋地黃樣因子濃度。?
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中標準曲線的繪制方法為：?
（1）采集胎盤，切成2cm×2cm×2cm大小的組織塊，液氮冷凍，保存于-80℃；?
（2）將冷凍胎盤組織塊切成片，置于勻漿器中，放入液氮罐中冷凍1分鐘；以1500rpm的速度將組織薄片勻漿5分鐘；?
（3）收集勻漿組織，加入等量的甲醇，混勻，以2000rpm的速度離心5分鐘，去除蛋白；收集離心上清液，真空濃縮，4℃保存；?
（4）取出試劑盒中地高辛抗體、二抗鼠抗羊IgG、2nM羊角拗苷甲、pH=7.4的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，分別等量加入，充分混合，室溫孵育；?
（5）再加入等量的PEG6000溶液，離心，得到沉淀物；?
（6）沉淀物用500微升pH7.4的PBS重懸，加入3H閃爍液200μL；?
（7）測量樣品放射量，得到樣品中所含內源性洋地黃樣因子濃度；?
（8）重復上述操作，步驟（4）羊角拗苷甲依次替換為5nM，10nM，20nM，50nM，0.1M和0.2M，同時，將步驟（6）加入3H閃爍液依次替換成5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL，測得數值繪制成標準曲線。?
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